BMP-2基因修饰的复层脱落乳牙牙髓干细胞膜片的体外构建研究

发布时间：2021-02-10 14:25

　　目的探讨BMP-2基因修饰的复层乳牙牙髓干细胞膜片的体外构建方法及基本生物学特性。方法分离培养脱落乳牙牙髓干细胞（stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHEDs）,并通过转染BMP-2基因进一步提高SHEDs的成骨能力,随后以SHEDs为种子细胞构建复层细胞膜片。利用倒置显微镜对细胞转染效率及成骨能力进行观察;通过HE染色和Masson染色对细胞膜片的结构和胶原分布进行检测;以免疫组织化学染色检测BMP-2蛋白的表达情况。结果体外分离培养了SHEDs,并证实其具有多向分化潜能。采用富含维生素C的培养基连续培养10 d左右即可获得白色膜样结构,该细胞膜片具有较好的弹性,叠加两层单层膜片继续培养24 h可构建具有良好韧性和机械性能的复层膜片。HE染色及Masson染色观察发现SHEDs膜片由多层细胞及丰富的细胞外基质组成。免疫组织化学染色示SHEDs膜片可表达BMP-2蛋白。结论 BMP-2基因修饰的SHEDs体外采用富含维生素C的培养基连续培养可构建具有良好机械性能的复层细胞膜片并持续表达BMP-2蛋白,该膜片将为牙周骨缺损修... 

【文章来源】：哈尔滨医科大学学报. 2020,54(03)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

SHEDs形态学观察及多向分化能力检测×100

实验组(BMP-2转染的SHEDs)中绿色荧光蛋白强表达，转染效率约为23.8%，而在对照组(未经BMP-2修饰的SHEDs)中则没有检测出荧光信号(图2)。经过成骨诱导培养后，与对照组相比，实验组显示出了更高的ALP活性和矿化能力(图3)。2.3 BMP-2修饰的复层SHEDs膜片的表征

SHEDs成膜片诱导10 d后，6孔板底部可见一层厚薄较为均匀的白色膜样物质，边缘微微卷起(图4A)，用细胞刮刀沿边缘轻轻分离，可获得连续的完整的细胞膜片。分离的膜片大小会自行收缩，置于PBS中可伸展开，具有良好的弹性(图4B)。将1张膜片分离并叠加于另一层膜片上，制备复层膜片(图4C)。复层膜片经过24 h的培养，与单层膜片对比，不透光性增大，厚度明显增加(图4D)。HE染色观察到膜片厚度均匀，单层膜片约为3～4层细胞构成(图5A)，细胞排列较为松散，复层膜片约6～8层细胞构成(图5B)，细胞排列紧密，细胞与细胞间可见均匀粉染的细胞外基质。Masson染色可见膜片中细胞外基质呈绿色，表明细胞外有大量胶原分泌(图5C、D)。BMP-2基因修饰的膜片组的BMP-2蛋白免疫组化染色可见棕黄色颗粒，表明经过膜片培养后SHEDs仍然持续表达BMP-2蛋白(图5E、F)。图4 BMP-2修饰的复层SHEDs膜片的大体观察照片

【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞膜片技术在组织工程中的应用与研究进展[J]. 周术奎,张楷乐,王营,傅强.  中国组织工程研究. 2016(11)



本文编号：3027506