抑制素基因免疫肉牛及免疫应答差异基因筛选

发布时间：2021-02-11 23:03

　　在激素基因免疫实践中发现,将抑制素基因疫苗免疫大动物,有近一半的个体对抑制素体液免疫没有产生应答反应,具体原因尚不明晰。本研究利用减毒沙门氏菌为载体的抑制素基因疫苗免疫西门塔尔牛,旨在探讨抑制素基因疫苗的促繁殖效果,并筛选与体液免疫反应有关的差异基因,为进一步完善抑制素基因免疫技术,提高抑制素基因免疫效果,促进其在动物繁殖领域的推广与应用,以及为探讨基因免疫应答分子机制奠定基础。主要研究内容与结果如下:1.抑制素基因免疫对西门塔尔牛卵泡发育及受胎的影响选择41头西门塔尔牛分为两组:对照组（n=11）注射10 ml PBS/头,免疫组（n=30）每头注射10⁹CFU/ml的抑制素重组菌C501（pVAX-asd-IS）10 ml。以初次免疫为第0天,14天后加强免疫,第28天对未发情牛用Ovysnch程序进行同期发情-定时人工授精处理,第29天进行B超检测,连续查6天,每天查一次,记录卵泡发育和排卵情况。结果显示,肌肉免疫抑制素重组菌C501后4周的抗体阳性率和抗体滴度均显著高于2周;免疫组大卵泡的数目（2.46±0.22 vs 1.50±0.29,P<0.0... 

【文章来源】：湖南农业大学湖南省

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

免疫反应路径（引自Li等[65]

202结果2.1质粒酶切特性将抽提到的pVAX-asd-IS质粒经HindIII和EcoRI双酶切后的产物电泳结果如2-1所示，泳道1和2为pVAX-asd-IS质粒经HindIII和EcoRI双酶切，在800bp左右有一条特异性条带，即为INH片段；泳道3和4为pVAX-asd-IS裸质粒电泳，出现两条带，结果显示提取出目的质粒。图2-1质粒pVAX-asd-IS双酶切产物电泳图M1：Marker3；泳道1-2：质粒pVAX-asd-IS经HindIII和EcoRI双酶切产物；泳道3-4：pVAX-asd-IS裸质粒Fig.2-1ElectrophoresisofpVAX-asd-ISgenedigesetedbydoublerestrictionendonucleasesM1：Marker3；Lane1-2:theproductofpVAX-asd-ISplasmiddigesetedwithHindIIIandEcoRI;Lane3-4:pVAX-asd-ISplasmid2.2菌液的PCR扩增产物特性利用PCR扩增S/INH目的基因，扩增产物大小为845bp（图2-2），序列大小与目的基因一致；对缺失基因crp进行鉴定，缺失菌株的PCR扩增产物大小为599bp（图2-3），序列大小与缺失目的基因一致；对缺失基因asd进行鉴定，扩增产物大小为315bp（图2-4），序列大小与缺失目的基因一致；对inVA基因进行鉴定，扩增产物大小为580bp（图2-5），序列大小与目的基因一致。上述结果表明，该重组菌可用于后续实验。

21图2-2基因SINH的PCR扩增产物电泳图M：AL5000DNAMarker；泳道1-6：SINH基因PCR扩增产物Fig.2-2ElectrophoresisofPCRproductofSINHgeneM:AL5000DNAMarker;Lane1-6:PCRproductofSINHgene图2-3基因crp的PCR扩增产物电泳图M：AL5000DNAMarker；泳道1-2：空白对照；泳道3-4：阴性对照；泳道5-6：缺失菌株扩增产物;泳道7-8：野生型菌株扩增产物Fig.2-3ElectrophoresisofPCRproductofcrpgeneM：AL5000DNAMarker；Lane1-2：blankcontrol；Lane3-4：negativecontrol；Lane5-6：deletedtypestrainamplificationproduct;Lane7-8：wildtypestrainamplificationproduct


本文编号：3029854