siRNA靶向沉默Notch1基因对T细胞淋巴瘤细胞Notch1/c-Myc信号通路影响的研究
发布时间：2021-02-12 20:25
目的探讨siRNA靶向沉默Notch1基因对T细胞淋巴瘤细胞的增殖及凋亡作用的影响,以及对T细胞淋巴瘤细胞Notch1/c-Myc信号通路的影响。方法选取Jurkat细胞作为T细胞淋巴瘤模型,取对数生长期的细胞进行如下实验研究。提取DNA进行Notch1基因的外显子27、34进行测序,测定其突变位点,利用RNA干扰技术（RNAi）合成两段小干扰RNA序列（siRNAⅠ和siRNAⅡ）靶向沉默Notch1基因。在进行细胞转染72h之后,利用共聚焦显微镜观看转染的绿色荧光（慢病毒携带）,然后用嘌呤霉素筛选成功转染的稳定的细胞株（慢病毒载体携带抗嘌呤霉素基因）。用筛选好的转染成功的Jurkat细胞进行该实验研究。每项试验至少重复三次。利用CCK-8法分析转染后的Jurkat细胞的活力;分别提取Jurkat细胞总RNA和总蛋白,进行实时荧光定量PCR（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western Blot）检测Notch1及其靶基因c-Myc和凋亡基因Caspase3 m RNA和蛋白相对表达水平;并利用流式细胞术检测siRNA靶向沉默Notch1基因对Jurkat细胞凋亡的影响。利用单因素方...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Notch1基因突变检测
研究发现 siNotch1 能明显降低 Jurkat 细胞的活RNA 转染组Ⅱ分别与细胞对照组和 siRNA 阴性对照组有表 3 和图 3 所示。表 3 Jurkat 细胞增殖能力分组 x±s P 值胞对照组 1.000 0.000A 阴性对照组 0.867 0.107 P=0.139*NA 转染组Ⅰ 0.472 0.202 P=0.000* P=0.001**NA 转染组Ⅱ 0.468 0.063 P=0.000* P=0.001** 胞活力分析。 x 代表平均数，s 表示标准差。*P 值表示与细胞对 siRNA 阴性对照组相比所得的统计学差异；***P 值表示 siRNA 转。
17图 4 siNotch1 基因增加 Jurkat 细胞的凋亡率（A）实验数据分析：**siRNA 转染组Ⅰ和 siRNA 转染组Ⅱ分别与细胞对照组相比有明显差异（P=0.000，P=0.002）；### siRNA 转染组Ⅰ和 siRNA 转染组Ⅱ分别与 siRNA 阴性对照组比有明显的差异（P=0.000，P=0.002）；并且细胞对照组和 siRNA 阴性对照组之间没有差异（P=0.891）, siRNA 转染组Ⅰ和 siRNA 转染组Ⅱ相比有明显的差异（P=0.000）。（B）使用流细胞术利用凋亡检测试剂盒（Annexin V-APC 和 PI）检测 Jurkat 细胞凋亡率的变化。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Targeted inhibition of Notch1 gene enhances the killing effects of Paclitaxel on triple-negative breast cancer cells[J]. Yu-Fu Zhou,Qian Sun,Ya-Jun Zhang,Geng-Ming Wang,Bin He,Tao Qi,Yan Zhou,Xing-Wang Li,Sheng Li,Lin He. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2017(02)
[2]Notch1 siRNA对小鼠恶性黑色素瘤细胞体内外增殖的抑制作用研究[J]. 齐艳霞,康世均,刘新会,罗荣城. 山东医药. 2014(10)
[3]小分子RNA干扰Notch1基因对肾癌Caki-1细胞增殖的影响[J]. 张振,王凯,曹振龙,邵志强,郭丰富. 现代肿瘤医学. 2014(02)
[4]质子海绵量子点-siRNA靶向Notch1蛋白治疗白血病的研究[J]. 杨艳萍,李薇,林海,杜忠华,王冠军. 免疫学杂志. 2013(06)
[5]Notch1蛋白在淋巴瘤组织的表达及意义[J]. 王晓霞,吴少玲,赵新东,刘相萍,常灿. 齐鲁医学杂志. 2013(01)
[6]靶向Notch1基因的siRNA对裸鼠人肝细胞癌移植瘤细胞增殖和凋亡的影响[J]. 刘虹. 中国现代医学杂志. 2012(04)
[7]RNA干扰Notch1基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响[J]. 毛俊,牟秋菊,李连宏,陶雅军,范姝君,王波,于晓棠. 临床与实验病理学杂志. 2012(01)
[8]靶向Notch-1基因的siRNA对人脑胶质母细胞瘤细胞裸鼠体内成瘤性的影响[J]. 孙晓朋,姚维成,栗世方,王建鹏. 中国癌症杂志. 2010(04)
[9]shRNA抑制NOTCH1基因对膀胱癌细胞BIU87生物学行为的影响[J]. 艾星,吴准,史涛坪,刘双林,王超,张国玺,居正华,王保军,张旭. 临床泌尿外科杂志. 2009(05)
[10]Notch信号在造血祖细胞扩增中作用的研究进展[J]. 李国辉,黄斯勇,康志杰,徐恒,梁英民. 中国实验血液学杂志. 2008(05)
本文编号：3031387
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Notch1基因突变检测
研究发现 siNotch1 能明显降低 Jurkat 细胞的活RNA 转染组Ⅱ分别与细胞对照组和 siRNA 阴性对照组有表 3 和图 3 所示。表 3 Jurkat 细胞增殖能力分组 x±s P 值胞对照组 1.000 0.000A 阴性对照组 0.867 0.107 P=0.139*NA 转染组Ⅰ 0.472 0.202 P=0.000* P=0.001**NA 转染组Ⅱ 0.468 0.063 P=0.000* P=0.001** 胞活力分析。 x 代表平均数，s 表示标准差。*P 值表示与细胞对 siRNA 阴性对照组相比所得的统计学差异；***P 值表示 siRNA 转。
17图 4 siNotch1 基因增加 Jurkat 细胞的凋亡率（A）实验数据分析：**siRNA 转染组Ⅰ和 siRNA 转染组Ⅱ分别与细胞对照组相比有明显差异（P=0.000，P=0.002）；### siRNA 转染组Ⅰ和 siRNA 转染组Ⅱ分别与 siRNA 阴性对照组比有明显的差异（P=0.000，P=0.002）；并且细胞对照组和 siRNA 阴性对照组之间没有差异（P=0.891）, siRNA 转染组Ⅰ和 siRNA 转染组Ⅱ相比有明显的差异（P=0.000）。（B）使用流细胞术利用凋亡检测试剂盒（Annexin V-APC 和 PI）检测 Jurkat 细胞凋亡率的变化。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Targeted inhibition of Notch1 gene enhances the killing effects of Paclitaxel on triple-negative breast cancer cells[J]. Yu-Fu Zhou,Qian Sun,Ya-Jun Zhang,Geng-Ming Wang,Bin He,Tao Qi,Yan Zhou,Xing-Wang Li,Sheng Li,Lin He. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2017(02)
[2]Notch1 siRNA对小鼠恶性黑色素瘤细胞体内外增殖的抑制作用研究[J]. 齐艳霞,康世均,刘新会,罗荣城. 山东医药. 2014(10)
[3]小分子RNA干扰Notch1基因对肾癌Caki-1细胞增殖的影响[J]. 张振,王凯,曹振龙,邵志强,郭丰富. 现代肿瘤医学. 2014(02)
[4]质子海绵量子点-siRNA靶向Notch1蛋白治疗白血病的研究[J]. 杨艳萍,李薇,林海,杜忠华,王冠军. 免疫学杂志. 2013(06)
[5]Notch1蛋白在淋巴瘤组织的表达及意义[J]. 王晓霞,吴少玲,赵新东,刘相萍,常灿. 齐鲁医学杂志. 2013(01)
[6]靶向Notch1基因的siRNA对裸鼠人肝细胞癌移植瘤细胞增殖和凋亡的影响[J]. 刘虹. 中国现代医学杂志. 2012(04)
[7]RNA干扰Notch1基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响[J]. 毛俊,牟秋菊,李连宏,陶雅军,范姝君,王波,于晓棠. 临床与实验病理学杂志. 2012(01)
[8]靶向Notch-1基因的siRNA对人脑胶质母细胞瘤细胞裸鼠体内成瘤性的影响[J]. 孙晓朋,姚维成,栗世方,王建鹏. 中国癌症杂志. 2010(04)
[9]shRNA抑制NOTCH1基因对膀胱癌细胞BIU87生物学行为的影响[J]. 艾星,吴准,史涛坪,刘双林,王超,张国玺,居正华,王保军,张旭. 临床泌尿外科杂志. 2009(05)
[10]Notch信号在造血祖细胞扩增中作用的研究进展[J]. 李国辉,黄斯勇,康志杰,徐恒,梁英民. 中国实验血液学杂志. 2008(05)
本文编号：3031387
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