内皮抑素和血管抑素融合基因在杆状病毒中的表达及抗肝癌效果评价

发布时间：2021-02-13 04:51

　　目的评价杆状病毒介导的内皮抑素和血管抑素融合蛋白（hEA）的抗肝癌效果。方法以质粒pFastBac DUAL为骨架,将pPh启动子替换为CMV,然后在其下游插入hEA基因,获得重组质粒pBac-ChEA,将pBac-ChEA转化DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选获得重组Bacmid,然后经脂质体法转染Sf-9昆虫细胞,获得重组杆状病毒Bac-ChEA。将重组病毒转导HUVEC细胞,通过ELISA、MTT、细胞划痕和血管网络形成检测hEA蛋白的表达以及对HUVEC细胞的增殖、迁移和血管形成的影响;建立裸鼠皮下肝癌肿瘤模型,评价杆状病毒介导的hEA的抗肝癌效果。结果经PCR鉴定成功构建了重组杆状病毒Bac-ChEA;hEA蛋白在Bac-ChEA转导的HUVEC细胞中成功获得了表达并且能够有效抑制HUVEC细胞的增殖、迁移以及血管网络的形成;体内结果表明Bac-ChEA组能有效抑制肝癌肿瘤体积的增长,小鼠寿命（中位生存期）从Bac-CMV组的24 d显著延长至Bac-ChEA组的36 d（P <0.05）。结论本研究成功让hEA蛋白在杆状病毒中获得了表达,并且能够有效地抑制HUVE... 

【文章来源】：实用医学杂志. 2020,36(15)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

重组杆状病毒Bac-ChEA PCR鉴定

通过划痕实验评估其对细胞迁移能力的影响。结果见图4,Bac-ChEA组与Bac-CMV和空白对照组相比，细胞迁移速度减慢，进一步通过计算划痕伤口面积，发现Bac-ChEA组与Bac-CMV组相比能显著抑制HU-VEC细胞伤口愈合（P<0.05），而Bac-CMV组与空白组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。说明杆状病毒介导的hEA蛋白能够有效地抑制HUVEC细胞的迁移。图3 杆状病毒介导的hEA蛋白对HUVEC细胞增殖能力的影响（n=3)

杆状病毒介导的hEA蛋白对HUVEC细胞增殖能力的影响（n=3)

【参考文献】：
期刊论文
[1]肝细胞癌对化疗耐药的机制研究进展[J]. 黄康,彭贵主,叶啟发.  实用医学杂志. 2018(22)



本文编号：3032000