RPW8.2转基因葡萄生物学特性观察及白粉病抗性评价
发布时间：2021-02-18 07:43
目前世界上广泛栽培的欧洲葡萄抗真菌能力差,尤其容易感染白粉病。利用基因工程技术提高葡萄的抗病性是葡萄分子育种的重要方向之一。课题组在前期研究中将拟南芥广谱抗性基因RPW8.2转到欧洲感病葡萄‘无核白’中,在室内接种白粉菌,转基因葡萄提高了对白粉菌的抗性。本研究是在前期研究的基础上,将该转基因葡萄栽植于塑料大棚中,观察转基因葡萄的生长特性,检测其对白粉病的抗性。主要结果如下:1.RPW8.2基因在转基因无核白葡萄中的表达并未影响植株的生物学特性;转基因与野生型植株的物候期时间差控制在5天以内;两周内的枝条伸长量差值控制在4 cm左右。2.对扦插苗和离体叶片接种葡萄白粉菌NAFU1,在温室中接种7 d后,在光照培养箱接种3、5、7、14 d后,台盼蓝染色,观察菌丝生长。结果表明,野生型植株叶片上的白粉菌菌丝长度、孢子梗数均为转基因植株的2倍以上,吸器健康、饱满,但在转基因植株叶片上吸器发育不良、颜色变深。白粉菌菌丝在转基因植株上的生长受到了抑制,转基因葡萄对白粉菌NAFU1的抗性高于野生型植株。3.转基因葡萄自然感染白粉菌15 d后,对叶片进行台盼蓝和DAB染色并统计孢子量。结果表明,转基...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：37 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同生长环境中的转基因葡萄A：玻璃温室内的转基因扦插苗；B：光照培养箱中的转基因植株离体叶片；
10无核白转基因葡萄生物学特性观察和白粉病抗性评价第三章 结果与分析3.1 转基因葡萄株系 PCR 检测为了确保移栽后存活的植株为转基因植株，提取其基因组 DNA，用 BamR82F 和SeqYFPR 特异引物进行 PCR 检测，相对应的阳性对照为自身启动子农杆菌菌液，阴性对照为野生型无核白植株。如图 2 所示，在菌液质粒和 24 株转基因植株中可以扩增出大小为 750 bp 的 RPW8.2 基因片段，而阴性对照植株则无法扩增出该片段。结果表明，供试植株的阳性率为 100%，为后续研究奠定了材料基础。
图 3 转基因葡萄株系的 Western Blot 检测Ponceau S，丽春红染色 Rubisco 蛋白；WT，野生型株系；1-24，24 个转基因株系。Fig. 3 Western Blot analysis of transgenic grapevines S, showing the protein stained by ponceau S; WT, wild type line; 1-24, transgenic lines oitive plants.萄物候期观察17 年 3 月，将生长状况一致的转基因和野生型无核白葡萄从科研温室移栽采用篱架式管理。由于树势较弱，当年未进行修剪。观察记录植株的生长源基因拷贝数的转基因植株在生长势上并无差别（图 4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国育成的葡萄新品种系谱分析[J]. 孟聚星,姜建福,张国海,孙海生,樊秀彩,张颖,吴久赟,刘崇怀. 果树学报. 2017(04)
[2]设施葡萄萌芽调控中需冷量和需热量及其相互关系[J]. 王西成,钱亚明,赵密珍,吴伟民,王庆莲. 植物生理学报. 2014(03)
[3]外源基因在苹果转基因植株的稳定性研究[J]. 王倩倩,常腾飞,师校欣,杜国强. 分子植物育种. 2013(04)
[4]植物转基因育种的分析与研究[J]. 赵彦平,赵春海. 生物技术通报. 2011(03)
[5]转抗虫基因三倍体毛白杨成年树木节肢动物及抗虫稳定性调查[J]. 郭培鑫,张军,刘朝华,庞新博. 河北林果研究. 2011(01)
[6]葡萄白粉病发病规律研究及防治技术[J]. 朱晓华,马俊义,帕提古丽,杨安沛,阿蔓古丽,沙达提. 新疆农业科学. 2011(02)
[7]生物技术与葡萄遗传育种[J]. 王军. 中国农业科学. 2009(08)
[8]转基因棉棉株体内主要营养物质和次生物质含量分析[J]. 陆宴辉,刘芳,杨益众,仲崇翔,王红,史晓利,康晓霞,余月书. 江苏农业学报. 2005(02)
[9]利用Bt基因和Xa21基因转化获得抗螟虫、白叶枯病的转基因水稻[J]. 王爱菊,姚方印,温孚江,朱常香,李广贤,杨磊,朱其松,张洪瑞. 作物学报. 2002(06)
[10]‘红地球’葡萄叶片、叶柄不定芽再生体系的建立[J]. 李云,冯慧,田砚亭. 园艺学报. 2002(01)
博士论文
[1]无核白葡萄体细胞胚再生体系建立与转基因研究[D]. 周起.西北农林科技大学 2014
硕士论文
[1]陕西关中地区两种栽培模式下不同鲜食葡萄品种品质特性[D]. 孔繁超.西北农林科技大学 2017
[2]拟南芥广谱抗病基因RPW8.2转化无核白葡萄的研究[D]. 李亚娟.西北农林科技大学 2016
[3]中国野生毛葡萄芪合成酶基因VqSTS6转化无核白葡萄的研究[D]. 程斯妍.西北农林科技大学 2015
[4]葡萄果形相关基因的克隆及功能分析[D]. 宋新新.南京农业大学 2014
本文编号：3039258
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：37 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同生长环境中的转基因葡萄A：玻璃温室内的转基因扦插苗；B：光照培养箱中的转基因植株离体叶片；
10无核白转基因葡萄生物学特性观察和白粉病抗性评价第三章 结果与分析3.1 转基因葡萄株系 PCR 检测为了确保移栽后存活的植株为转基因植株，提取其基因组 DNA，用 BamR82F 和SeqYFPR 特异引物进行 PCR 检测，相对应的阳性对照为自身启动子农杆菌菌液，阴性对照为野生型无核白植株。如图 2 所示，在菌液质粒和 24 株转基因植株中可以扩增出大小为 750 bp 的 RPW8.2 基因片段，而阴性对照植株则无法扩增出该片段。结果表明，供试植株的阳性率为 100%，为后续研究奠定了材料基础。
图 3 转基因葡萄株系的 Western Blot 检测Ponceau S，丽春红染色 Rubisco 蛋白；WT，野生型株系；1-24，24 个转基因株系。Fig. 3 Western Blot analysis of transgenic grapevines S, showing the protein stained by ponceau S; WT, wild type line; 1-24, transgenic lines oitive plants.萄物候期观察17 年 3 月，将生长状况一致的转基因和野生型无核白葡萄从科研温室移栽采用篱架式管理。由于树势较弱，当年未进行修剪。观察记录植株的生长源基因拷贝数的转基因植株在生长势上并无差别（图 4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国育成的葡萄新品种系谱分析[J]. 孟聚星,姜建福,张国海,孙海生,樊秀彩,张颖,吴久赟,刘崇怀. 果树学报. 2017(04)
[2]设施葡萄萌芽调控中需冷量和需热量及其相互关系[J]. 王西成,钱亚明,赵密珍,吴伟民,王庆莲. 植物生理学报. 2014(03)
[3]外源基因在苹果转基因植株的稳定性研究[J]. 王倩倩,常腾飞,师校欣,杜国强. 分子植物育种. 2013(04)
[4]植物转基因育种的分析与研究[J]. 赵彦平,赵春海. 生物技术通报. 2011(03)
[5]转抗虫基因三倍体毛白杨成年树木节肢动物及抗虫稳定性调查[J]. 郭培鑫,张军,刘朝华,庞新博. 河北林果研究. 2011(01)
[6]葡萄白粉病发病规律研究及防治技术[J]. 朱晓华,马俊义,帕提古丽,杨安沛,阿蔓古丽,沙达提. 新疆农业科学. 2011(02)
[7]生物技术与葡萄遗传育种[J]. 王军. 中国农业科学. 2009(08)
[8]转基因棉棉株体内主要营养物质和次生物质含量分析[J]. 陆宴辉,刘芳,杨益众,仲崇翔,王红,史晓利,康晓霞,余月书. 江苏农业学报. 2005(02)
[9]利用Bt基因和Xa21基因转化获得抗螟虫、白叶枯病的转基因水稻[J]. 王爱菊,姚方印,温孚江,朱常香,李广贤,杨磊,朱其松,张洪瑞. 作物学报. 2002(06)
[10]‘红地球’葡萄叶片、叶柄不定芽再生体系的建立[J]. 李云,冯慧,田砚亭. 园艺学报. 2002(01)
博士论文
[1]无核白葡萄体细胞胚再生体系建立与转基因研究[D]. 周起.西北农林科技大学 2014
硕士论文
[1]陕西关中地区两种栽培模式下不同鲜食葡萄品种品质特性[D]. 孔繁超.西北农林科技大学 2017
[2]拟南芥广谱抗病基因RPW8.2转化无核白葡萄的研究[D]. 李亚娟.西北农林科技大学 2016
[3]中国野生毛葡萄芪合成酶基因VqSTS6转化无核白葡萄的研究[D]. 程斯妍.西北农林科技大学 2015
[4]葡萄果形相关基因的克隆及功能分析[D]. 宋新新.南京农业大学 2014
本文编号：3039258
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