梭梭HabHLH74转录因子基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

发布时间：2021-02-19 11:41

　　利用分子生物学技术从梭梭中克隆了HabHLH74转录因子基因,在大肠杆菌中表达HabHLH74蛋白,旨在为梭梭抗逆分子机理提供研究基础。研究结果表明:①利用RT-PCR技术成功扩增了HabHLH74的完整编码区c DNA序列,HabHLH74编码区cDNA序列长度为1 218 bp。根据HabHLH74编码区序列预测出其编码蛋白的理化性质。②成功构建了HabHLH74基因的原核表达载体pET28a（+）-HabHLH74,并在大肠杆菌中成功表达了梭梭HabHLH74蛋白,其分子量为43.6 kDa。③对诱导条件进行单因素试验后获得的最佳诱导表达条件:诱导剂IPTG浓度为0.5 mmol/L,诱导温度为37℃,诱导时间为6 h。④对在优化条件下诱导后的菌体进行超声破碎后发现梭梭HabHLH74蛋白主要以包涵体形式存在;降低诱导温度（16℃、25℃诱导）未能得到可溶性表达的梭梭HabHLH74蛋白。 

【文章来源】：畜牧与饲料科学. 2020,41(05)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

重组菌诱导表达产物的SDS-PAGE凝胶电泳检测结果

2.5.3 诱导时间的优化在诱导温度（37℃）和诱导剂浓度（0.5 mmol/L）恒定不变的前提下，分别对诱导0、2、3、4、5、6、7、8、9 h的表达样品进行SDS-PAGE电泳检测，结果显示，在加入诱导剂的0～6 h目的蛋白表达量逐渐升高，6 h以后开始下降（见图7）。因此，最佳诱导时间为6 h。

对16℃过夜诱导、25℃诱导4 h、42℃诱导4 h的重组菌BL21(DE3)-p ET28a(+)-Hab HLH74菌体超声破碎后的上清液和沉淀分别进行SDS-PAGE凝胶电泳，分析Hab HLH74蛋白的表达形式。结果见图9，泳道2、3、4分别为16、25、42℃诱导表达之后上清液中的蛋白，泳道5、6、7为沉淀中的蛋白；结果显示，上清液中没有明显的目的蛋白条带，说明Hab HLH74蛋白仍然主要以包涵体形式存在，改变诱导条件不能得到可溶性的目的蛋白。图7 不同诱导时间诱导表达的Hab HLH74蛋白的SDS-PAGE凝胶电泳检测结果

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3041069