ECEL1基因敲减对肝癌细胞凋亡的影响

发布时间：2021-03-01 13:32

　　目的:研究ECEL1基因对肝癌细胞凋亡的影响,为肝癌防治提供新的靶点。方法:应用ECEL1基因的慢病毒载体,体外感染人肝癌细胞（BEL-7404、Huh-7）并通过荧光显微镜检测感染效率。提取细胞总RNA以及总蛋白,通过qPCR以及Western blot检测细胞中ECEL1 mRNA以及蛋白的表达水平;通过流式细胞术检测BEL-7404、Huh-7细胞的凋亡率及细胞周期。最后应用Caspase-Glo?3/7 Assay试剂盒检测BEL-7404、Huh-7细胞中Caspase 3/7的活性。结果:1.ECEL1基因慢病毒载体体外感染人肝癌细胞后,检测感染效率大于80%。2.shECEL1组BEL7404、Huh-7细胞内的ECEL1 mRNA以及蛋白表达水平均要显著低于shCtrl对照组（P<0.01）。3.流式检测结果显示,ECEL1基因敲减后BEL-7404、Huh-7细胞的细胞凋亡率显著上升,均要显著高于shCtrl对照组（P<0.01）。4.shRNA抑制BEL-7404、Huh-7细胞内ECEL1基因表达后,BEL-7404细胞S期明显减少,G2/M期的细胞则... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

慢病毒转染肝癌细胞后shECEL1组和schCtrl组荧光镜检测图（X100）

南华大学硕士学位论文组的 1.001±0.065(P＜0.01)，敲减率达到 60.7%。此外，Western blot 结果显示，BEL-7404 细胞中 shECEL1 组 ECEL1 蛋白表达水平仅为 0.2120±0.0203，显著低于未敲减 shCtrl 组的 0.8868±0.0312（P＜0.01）；而 Huh-7 细胞中 shECEL1组蛋白质的表达水平仅为 0.3230±0.0143，显著低于未敲减 shCtrl 组的 0.8236±0.0443(P＜0.01)(图 3)。综上，ECEL1 mRNA 以及蛋白的表达水平均提示BEL-7404 细胞中的 ECEL1 基因敲减成功。

第 4 章 实验结果后 BEL7404、Huh-7 细胞的凋亡水平显著上升，两种细胞株(BEL7404、Huh-7)shECEL1 组与 schCtrl 组比较，差异均有显著性(P<0.01)(表 5，图 4)。表 5. ECEL1 基因敲减对 BEL-7404、Huh-7 细胞凋亡率(%)的影响注：与 shCtrl 相比较，**代表 P<0.01BEL-7404分组 BEL-7404 Huh-7shCtrlshECEL13.79±0.20547.50±0.3652**0.44±0.04027.78±0.0705**

【参考文献】：
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本文编号：3057554