miR-499靶向PTEN基因调控猪未成熟支持细胞生长的机理研究

发布时间：2021-03-02 00:14

　　雄性动物睾丸的大小可在一定程度上影响其射精量以及精子发生的有序进行,对雄性动物的繁殖能力具有重要的作用。microRNA（miRNA）是一类调节转录后水平基因表达的内源性非编码RNA,在睾丸发育和精子发生过程中起重要调节作用。本课题组前期采用RNA-seq技术在不同发育阶段的猪睾丸组织中鉴定出374个miRNA,发现miR-499在沙子岭猪性成熟前后的睾丸组织中差异表达。本研究综合利用多种分子实验技术于细胞水平研究了miR-499及其靶基因PTEN通过PI3K/AKT信号通路对猪未成熟支持细胞增殖和凋亡的作用,以期为提高雄性动物的繁殖能力提供理论依据。研究结果如下:（1）miR-499靶向调控PTEN基因在猪未成熟支持细胞中的表达根据miR-499靶基因预测信息,构建了pmirGLO-PTEN-3′UTR-WT/MUT载体,并与miR-499 mimic和mimic NC进行猪未成熟支持细胞的共转染,检测荧光素酶活性。结果显示,miR-499 mimic+pmirGLO-PTEN-3′UTR-WT共转染组的荧光活性极显著低于其它三组（P<0.01）,表明miR-499可靶向PTE... 

【文章来源】：湖南农业大学湖南省

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

精子在睾丸组织中的发生过程[10]

18图1靶基因PTEN结合位点预测Fig1TargetgenePTENbindingsiteprediction将pmirGLO-PTEN-WT/MUT和miR-499mimic/mimicNC共转染至猪未成熟支持细胞中，检测细胞荧光素酶活性。结果如图2所示，当miR-499mimic/mimicNC分别与pmirGLO-PTEN-WT/MUT共转染时，pmirGLO-PTEN-WT+miR-499mimic组荧光素酶活性极显著低于pmirGLO-PTEN-WT+NC组(P<0.01)，而pmirGLO-PTEN-MUT+miR-499mimic组与pmirGLO-PTEN-MUT+NC组荧光素酶活性无显著差异（P>0.05）。结果表明，miR-499能够靶向PTEN基因3′UTR预测结合位点处。图2荧光素酶活性检测结果Fig2Detectionresultsofluciferaseactivity2.2miR-499抑制PTEN基因在猪未成熟支持细胞中的表达在进行miR-499过表达和抑制表达实验之前，我们先对miR-499mimic和miR-499inhibitor的转染效率进行了检测，结果如图3所示，转染miR-499mimic后miR-499表达量显著高于阴性对照组（P<0.05）（图A），转染miR-499inhibitor后miR-499

18图1靶基因PTEN结合位点预测Fig1TargetgenePTENbindingsiteprediction将pmirGLO-PTEN-WT/MUT和miR-499mimic/mimicNC共转染至猪未成熟支持细胞中，检测细胞荧光素酶活性。结果如图2所示，当miR-499mimic/mimicNC分别与pmirGLO-PTEN-WT/MUT共转染时，pmirGLO-PTEN-WT+miR-499mimic组荧光素酶活性极显著低于pmirGLO-PTEN-WT+NC组(P<0.01)，而pmirGLO-PTEN-MUT+miR-499mimic组与pmirGLO-PTEN-MUT+NC组荧光素酶活性无显著差异（P>0.05）。结果表明，miR-499能够靶向PTEN基因3′UTR预测结合位点处。图2荧光素酶活性检测结果Fig2Detectionresultsofluciferaseactivity2.2miR-499抑制PTEN基因在猪未成熟支持细胞中的表达在进行miR-499过表达和抑制表达实验之前，我们先对miR-499mimic和miR-499inhibitor的转染效率进行了检测，结果如图3所示，转染miR-499mimic后miR-499表达量显著高于阴性对照组（P<0.05）（图A），转染miR-499inhibitor后miR-499


本文编号：3058229