白桦BpbZIP1基因的克隆及其功能分析

发布时间：2021-03-03 11:52

　　bZIP转录因子（basic-region leucine zipper）一种碱性亮氨酸拉链转录因子,bZIP家族属于最大的转录家族之一,其具有多种生物学功能,包括调控非生物胁迫反应。为鉴定白桦（Betula platyphylla Suk）抗非生物胁迫的bZIP基因,本研究利用生物信息学分析、表达模式分析及转基因功能分析等方法分析BpbZIP1的耐盐性,获得如下结果:进行抗性相关基因系统进化分析,结果显示BpbZIP1与拟南芥抗性相关基因蛋白聚为一组。利用实时定量荧光法分析BpbZIP1基因和抗性相关的SOD、POD基因盐、旱胁迫梯度时间下的表达量,结果显示BpbZIP1基因与SOD、POD基因表达模式相似,受NaC1处理的诱导,在甘露醇处理下,表达变化不明显。利用基因枪介导的瞬时转化法将BpbZIP1-PBI121-GFP融合表达载体转化洋葱表皮细胞进行亚细胞定位,结果表明BpbZIP1基因定位在细胞核上。将BpbZIP1基因过表达载体转入拟南芥中,盐、旱胁迫处理转基因材料后进行组织化学染色（NBT、DAB、Evans Blue）。转基因株系在NaCl胁迫条件下,清除活性氧的能力较... 

【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１野生型白桦ＲＮＡ检测电泳图??

ｖ．２．０网站??（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＴＭＨＭＭ－２．０）对?基因跨膜域进行预测。??２．３结果分析??２．３．１白桦柳基因的鉴定与克隆??阅读大量抗性相关ｂＺＩＰ家族文献后得到拟南芥中抗性相关基因，在白桦数据库中进??行同源比对，得到相似度极高的白桦５Ｐ０２０Ｍ３．２基因。通过ＮＣＢＩ网站中ｂｌａｓｔＸ程序对??该基因序列进行比对分析，确定了该基因含有完整的开放读码框（０ＲＦ），功能注释为??６Ｚ／尸基因。利用ＲＴ－ＰＣＲ对其进行克隆（图２－２），测序成功，命名为办６Ｚ／Ｐ７。??￣ｌＳｓ??２８ｓ??图２－１野生型白桦ＲＮＡ检测电泳图??２０００ｂｐ??１２５９ｂｐ??ｌＯＯＯｂｐ??５００ｂｐ??２５０ｂｐ??２００ｂ?ｐ??图２－２?ＰＣＲ扩增５冲Ｚ／Ｐｉ基因检测电泳图??（ｍａｋｅｒ：?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ２０００?）??－１２－??

?２白桦母基因克隆与生物信息学分析???２．３．２白桦聊２７Ｐ７基因的生物信息学分析??１．白桦办６ＺＪＰｉ基因序列分析??在ＮＣＢＩ网站数据库中，其保守区进行预测（图２－３）并绘制出白桦办６Ｚ／Ｗ基因??的开放阅读框，利用软件ＢｉｏＥｄｉｔ翻译出蛋白序列。并对其保守区进行预测，结果显示其??含有ｂＺＩＰ蛋白保守区（图２－３）．??办６Ｚ／Ｗ基因阅读框为＋１，起始在ＡＴＧ，终止在ＴＧＡ，总共编码４８５个氨基酸残基，??其氨基酸序列如下：??ＭＮＬＫＮＦＧＴＤＰＰＧＤＧＮＧＲＰＰＧＮＦＰＬＩＲＱＳＳＩＹＳＬＴＦＤＥＬＱＮＴＭＧＧＳＩＧＫＤＦＧＳＭＮＭＤＥＬ??ＬＫＭＷＳＡＥＤＡＱＳＩＭＡＫＰＳＷＴＴＧＰＥＧＴＶＰＰＧＧＹＬＱＲＱＧＳＬＴＬＰＲＴＬＳＱＫＴＶＤＥＶＷＲＤＩＳ??ＱＤＧＡＧＮＧＳＳＳＬＰＱＲＱＨＴＬＧＥＭＴＬＥＥＦＬＦＲＡＧＶＶＲＥＤＴＱＬＤＡＫＰＡＧＧＳＡＳＴＧＧＦＬＧＮＴ??ＧＬＧＩＧＦＱＱＴＧＧＧＴＧＬＭＧＮＲＩＡＥＳＮＮＱＦＳＩＱＳＳＮＬＰＬＮＶＮＧＶＲＳＤＱＴＱＬＳＲＰＱＱＰＱＩＦＰＫ??ＰＶＴＭＡＹＧＴＨＱＭＰＱＬＧＳＰＧＭＲＧＧＩＶＧＩＧＤＱＧＬＳＳＧＬＩＱＳＡＡＬＱＧＧＧＭＧＭＶＧＬＧＡＧＡＧ??ＡＧＧＶＳＶＧＴＧＳＰＡＮＱＬＳＳＤＧＬＧＫＳＮＧＤＭＳＳＶＳＰＶＰＹＡＦＮＧＧＬＲＧＲＲＳＧＧＰＶＥＫＶＶＥＲＲ??ＱＲＲＭＩＫＮＲＥＳＡＡＲＳＲＡＲＫＱＡＹＴＭＥＬＥＡＥＶＡＫＬＫＥＤＮＥＥＬＱＫＫＱＥＥＩＭＥＭＱＫＮＱＶＬＥＩ??ＭＮＬＱＲＧＶＫＫＱＣＬＲＫＴＬＳＧＰＷ＊??１?５５＊?Ｃ６＃?ｒｔ＜？?Ｈ７２??ｃｏｌｌ??Ｗｉｆｉ?ｂｉｎｄｉｎｇ??Ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｈｉｔｓ

【参考文献】：
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博士论文
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本文编号：3061217