鹅HIF-1α基因克隆与组织表达分析

发布时间：2021-03-04 20:52

　　缺氧诱导因子-1（HIF-1）是在缺氧细胞中发现的一种转录因子,在生物体氧平衡调节中起关键作用.缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）是HIF-1活化的关键调控因子,参与细胞的生长、分化和凋亡的调节.为进一步了解家鹅的缺氧应答系统,本研究参考NCBI上公布的鹅HIF-1α基因序列设计引物,并成功克隆了马岗鹅HIF-1α mRNA,获得了HIF-1α完整的ORF序列,全长为2 403 bp,编码800个氨基酸.研究表明,马岗鹅HIF-1α基因结构保守,在家禽中的同源性较高且与鸡的同源性最高达到94.1%,蛋白结构主体包含螺旋-环-螺旋模式（Helix loop helix, HLH）、PAS（Per ARNT Sim）蛋白、PAC（Motif C-terminal to PAS motifs）等结构域,符合HIF-1α蛋白的结构特征.组织表达差异分析结果显示HIF-1α基因在肺和胰腺表达高,在肌肉中表达低,在气管中几乎不表达. 

【文章来源】：仲恺农业工程学院学报. 2020,33(02)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

组织表达差异分析

用液氮研磨保存的鹅脑组织,提取RNA,并反转录成cDNA,利用设计的引物成功扩增出一个片段,长度约为2 400 bp(图1). 用cDNA作为模板,进行多管扩增,将扩增产物进行胶回收,取回收产物4.5 μL连接T载体,摇菌13 h后抽取质粒做酶切鉴定,送往Sangon生物公司进行核苷酸序列测序,测序结果表明扩增的目的基因片段大小为2 403 bp(图2),经BlastN比对发现,与Genbank上公布的预测序列相符,证明已成功克隆鹅HIF-1α基因.克隆的鹅HIF-1α基因包含完整的ORF,长度为2 403 bp,编码800个氨基酸.图2 HIF-1α质粒的酶切鉴定

HIF-1α质粒的酶切鉴定

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]缺氧诱导因子-1α在紫外线诱导皮肤癌发生中的作用及其信号通路的研究[D]. 李燕华.南京医科大学 2007

硕士论文
[1]HIF1A基因对高原高血压影响因素研究[D]. 张力平.青海师范大学 2015



本文编号：3063899