七鳃鳗miR-4561靶向LIP基因调控抗感染的功能分析
发布时间：2021-03-07 15:33
细胞杀伤或是胞毒作用是免疫应答最本质的效应之一。不论由抗体、补体介导的体液性杀伤,还是由巨噬细胞、T细胞及NK细胞等介导的细胞性杀伤,都是机体抵御病原微生物及肿瘤细胞的有效手段。七鳃鳗是古老的圆口纲生物,在进化和发育研究中具有重要地位。实验室前期研究发现,七鳃鳗受病原体感染时,粒细胞分泌一种新型免疫蛋白LIP分子,其含有Jacalin凝集素结构域和Aerolysin结构域。七鳃鳗LIP蛋白不但能够特异性识别杀伤肿瘤细胞,还对细菌的感染具有显著应答效应,并在固有免疫系统中发挥重要作用。MicroRNA（miRNA）是一种长约19-25nt的小非编码RNA,通过与m RNA 3’UTR碱基配对在转录后发挥作用,能够广泛调节生物体内的基因表达。本研究旨在明确七鳃鳗中的miRNA参与免疫调控作用,鉴定调控LIP的关键miRNA分子,并通过体外体内实验明确该miRNA分子在调控LIP参与七鳃鳗免疫防御的分子机制。1.实验前期使用鳗弧菌感染七鳃鳗8h和17d模拟固有免疫和适应性免疫,并将0h、8h和17d的组织样本进行总RNA的抽提及小RNA建库测序。经过数据质控获得miRNA的clean rea...
【文章来源】：辽宁师范大学辽宁省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
miRNA的生物发生及其作用机制[8]
辽宁师范大学硕士学位论文-7-含有该结构域的蛋白存在的共同特点在于，核酸序列间的具有更高的多态性，这也为在不同物种中搜寻鉴定此类蛋白增大了难度，未来蛋白鉴定技术的成熟将有利于进一步探索ALPs成员的分布[39]。图1.1LIP的可溶单体的结构图[40]Fig.1.1Phylogenetictreeofserpinsuperfamily[40]A.LIP的整体结构.LIP亚单位的凝集素模块和溶氧素模块的中间和C末端部分分别以蓝色、橙色和绿色显示.前发夹（假定的跨膜区）显示为粉红色；B.LIP与Dln1重叠.不对称单元中LIP的第二亚单位为沙棕色，Dln1显示为紫色；C.LIP单体的拓扑图.在动物或植物中Aerolysin样蛋白通常包含了Aerolysin和其他结构域，如图1.2。不同结构域与Aerolysin融合后产生的新蛋白与单独Aerolysin结构域构成的α-Toxin蛋白具有不同的功能[38,41]。例如，Hemolysin-3对鸡胚和人红细胞具有明显的凝血特性，动物实验表明作为人类病原体产生的肠毒素之一的Hemolysin-3对肠细胞游离钙浓度的影响导致其对心脏和其他细胞具有不同程度的毒性作用[42,43]。又如，在日本蝾螈胚胎表皮中发现的EP37是由Aerolysin和βγ晶体结构域共同组成的一种蛋白，研究表明该蛋白在蝾螈胚胎发育及两栖环境适应中受到严格调控[44]。2005年在海蟾鱼（Thalassophrynenattereri）背部和头部的两个毒腺中首次分离出了这类可以导致皮肤水肿和疼痛的毒液毒素蛋白，并命名为Natterin，具有和LIP相同结构域，其具有激肽释放酶活性可切割人激肽原，促进激肽的释放，目前对其未知的功能仍有待探究[45]。
七鳃鳗miR-4561靶向LIP基因调控抗感染的功能分析-8-图1.2溶氧素/ETX成孔超家族的结构域[38]Fig.1.2Phylogenetictreeofserpinsuperfamily[34]1-4存在于细菌中，5-11存在于真核生物中。(1)α-Toxin，gi:452163[Clostridiumsepticum];(2)Hemolysin-3，gi:2501300[Aeromonashydrophila];(3)假设蛋白BACUNI_04630，gi:160892167[BacteroidesuniformisATCC8492];(4)pXO2-60蛋白，gi:10956450[Bacillusanthracis];(5)假设蛋白CAN71829，gi:147838248[Vitisvinifera];(6)ep37-L2，gi:2339973[Cynopspyrrhogaster];(7)Natterin-3前体，gi:75571591[Thalassophrynenattereri];(8)假设蛋白NEMVEDRAFT_v1g221281，gi:156349328[Nematostellavectensis];(9)假设蛋白LOC494812，gi:148223884[Xenopuslaevis];(10)假设蛋白LOC613112，gi:73853870[Xenopustropicalis];(11)Dln1LOC568775，gi:162139040[Daniorerio].1.2.2LIP蛋白的生物学功能在先前的研究中表明LIP杀伤肿瘤细胞依赖于N-连接聚糖结合脂筏中GPI锚定蛋白（GPI-APs）和鞘磷脂（SM）的双重识别机制[40]，增加细胞膜的通透性导致细胞器的形态改变，LIP处理后的MCF-7细胞发生了胞浆钙离子浓度上升与炎症信号的激活，最终出现细胞焦亡与程序性坏死[46]。在七鳃鳗中的LIP能够明显诱发肿瘤细胞死亡，其特
【参考文献】：
期刊论文
[1]病毒来源的microRNA的研究进展[J]. 屈允月,钟照华,佟雷. 病毒学报. 2019(06)
本文编号：3069369
【文章来源】：辽宁师范大学辽宁省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
miRNA的生物发生及其作用机制[8]
辽宁师范大学硕士学位论文-7-含有该结构域的蛋白存在的共同特点在于，核酸序列间的具有更高的多态性，这也为在不同物种中搜寻鉴定此类蛋白增大了难度，未来蛋白鉴定技术的成熟将有利于进一步探索ALPs成员的分布[39]。图1.1LIP的可溶单体的结构图[40]Fig.1.1Phylogenetictreeofserpinsuperfamily[40]A.LIP的整体结构.LIP亚单位的凝集素模块和溶氧素模块的中间和C末端部分分别以蓝色、橙色和绿色显示.前发夹（假定的跨膜区）显示为粉红色；B.LIP与Dln1重叠.不对称单元中LIP的第二亚单位为沙棕色，Dln1显示为紫色；C.LIP单体的拓扑图.在动物或植物中Aerolysin样蛋白通常包含了Aerolysin和其他结构域，如图1.2。不同结构域与Aerolysin融合后产生的新蛋白与单独Aerolysin结构域构成的α-Toxin蛋白具有不同的功能[38,41]。例如，Hemolysin-3对鸡胚和人红细胞具有明显的凝血特性，动物实验表明作为人类病原体产生的肠毒素之一的Hemolysin-3对肠细胞游离钙浓度的影响导致其对心脏和其他细胞具有不同程度的毒性作用[42,43]。又如，在日本蝾螈胚胎表皮中发现的EP37是由Aerolysin和βγ晶体结构域共同组成的一种蛋白，研究表明该蛋白在蝾螈胚胎发育及两栖环境适应中受到严格调控[44]。2005年在海蟾鱼（Thalassophrynenattereri）背部和头部的两个毒腺中首次分离出了这类可以导致皮肤水肿和疼痛的毒液毒素蛋白，并命名为Natterin，具有和LIP相同结构域，其具有激肽释放酶活性可切割人激肽原，促进激肽的释放，目前对其未知的功能仍有待探究[45]。
七鳃鳗miR-4561靶向LIP基因调控抗感染的功能分析-8-图1.2溶氧素/ETX成孔超家族的结构域[38]Fig.1.2Phylogenetictreeofserpinsuperfamily[34]1-4存在于细菌中，5-11存在于真核生物中。(1)α-Toxin，gi:452163[Clostridiumsepticum];(2)Hemolysin-3，gi:2501300[Aeromonashydrophila];(3)假设蛋白BACUNI_04630，gi:160892167[BacteroidesuniformisATCC8492];(4)pXO2-60蛋白，gi:10956450[Bacillusanthracis];(5)假设蛋白CAN71829，gi:147838248[Vitisvinifera];(6)ep37-L2，gi:2339973[Cynopspyrrhogaster];(7)Natterin-3前体，gi:75571591[Thalassophrynenattereri];(8)假设蛋白NEMVEDRAFT_v1g221281，gi:156349328[Nematostellavectensis];(9)假设蛋白LOC494812，gi:148223884[Xenopuslaevis];(10)假设蛋白LOC613112，gi:73853870[Xenopustropicalis];(11)Dln1LOC568775，gi:162139040[Daniorerio].1.2.2LIP蛋白的生物学功能在先前的研究中表明LIP杀伤肿瘤细胞依赖于N-连接聚糖结合脂筏中GPI锚定蛋白（GPI-APs）和鞘磷脂（SM）的双重识别机制[40]，增加细胞膜的通透性导致细胞器的形态改变，LIP处理后的MCF-7细胞发生了胞浆钙离子浓度上升与炎症信号的激活，最终出现细胞焦亡与程序性坏死[46]。在七鳃鳗中的LIP能够明显诱发肿瘤细胞死亡，其特
【参考文献】：
期刊论文
[1]病毒来源的microRNA的研究进展[J]. 屈允月,钟照华,佟雷. 病毒学报. 2019(06)
本文编号：3069369
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3069369.html
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