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利用CRISPR/Cas9技术对miRNA-125a进行基因编辑的实验研究

发布时间:2021-03-13 14:06
  基因的定点修饰技术是研究基因功能的重要手段之一,而基因定点修饰技术的发展也经历了从早期的基因打靶到三代人工核酸内切酶的过程。第三代人工核酸内切酶 Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats(CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)因其操作简便、成本低廉、作用高效,被广泛应用于生物学研究中的各个领域。目前,CRISPR/Cas9技术多被用于基因编码领域,但是在ncRNA尤其是miRNA中的应用相对较少见报道。miRNA是一类长约22nt,具有广泛生物活性的ncRNA。成熟的miRNA主要通过与靶基因3’UTR上的靶点进行碱基互补配对实现对靶基因的表达调控。miRNA-125a是一种在进化上高度保守的miRNA,它的两个成熟态5p及3p均有生物学功能,我们前期研究显示miRNA-125a参与胚胎植入和复发性流产的发生。本研究以miRNA-125a为切入点,利用CRISPR/Cas9技术构建针对miRNA-125a的定点编辑细胞系及小鼠模型,并从体内和体外分别探究miRNA-125a的功能,主要分为以... 

【文章来源】:北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】:103 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

利用CRISPR/Cas9技术对miRNA-125a进行基因编辑的实验研究


砚改造后的pX45容载体

利用CRISPR/Cas9技术对miRNA-125a进行基因编辑的实验研究


一不同细胞系m1RNA一125a表达量(叮,<0.05,月=3)

利用CRISPR/Cas9技术对miRNA-125a进行基因编辑的实验研究


一人pre.miRNA口125a序列及sgRNA位置


本文编号:3080353

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