一个CMV新寄主的鉴定及CMV-RNA3基因间隔区的功能研究

发布时间：2021-03-14 02:56

　　萝藦是萝藦科萝藦属的多年生草质藤本植物,在中国具有广泛的分布,常见于南瓜、大豆和玉米等重要经济作物的种植区。萝藦作为中药食用,具有清热解毒、治疗劳损、蛇咬、咳嗽等作用,小分子提取物有抗肿瘤效果,多糖能改善机体的免疫力。黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）是雀麦花叶病毒科黄瓜花叶病毒属的模式种,具有广泛的寄主和极强的变异能力,由多种媒介昆虫传播,在世界范围内危害巨大。我们于2016年在南瓜地里发现了表现严重花叶症状的萝藦,疑似感染了病毒病,为防范病株萝藦可能带来的疾病传播,有必要对其病原进行鉴定。此外,学者在原生质体水平上发现CMV RNA3基因间隔区（Intergenic region,IGR）具有亚基因组RNA4的核心启动子及起始（+）RNA3合成的元件,但在植物体水平上还没有相关的研究,所以我们在植物体水平上,开展了病毒系统侵染过程中IGR相关功能的研究。1.一个黄瓜花叶病毒新寄主的鉴定首先提取萝藦病叶的双链RNA（dsRNA）和病叶粗汁液,分别进行PAGE电泳和生物学接种。结果显示,摩擦接种的本氏烟在接种后3天,叶片开始轻微地卷曲并表现斑驳,说明该病... 

【文章来源】：江苏科技大学江苏省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 研究背景
    1.2 黄瓜花叶病毒研究现状
        1.2.1 黄瓜花叶病毒的危害及利用
        1.2.2 黄瓜花叶病毒的粒子形态和基因组特征
        1.2.3 黄瓜花叶病毒的症状表现
        1.2.4 黄瓜花叶病毒的株系划分
        1.2.5 黄瓜花叶病毒的防控策略
    1.3 黄瓜花叶病毒基因间隔区的研究进展
        1.3.1 正链RNA病毒非编码区序列的功能简述
        1.3.2 基因间隔区与亚基因组RNA4 的合成
    1.4 病毒样症状植株的病原鉴定方法
        1.4.1 已知病毒的检测方法
        1.4.2 未知病毒的检测方法
    1.5 研究目的及意义
    1.6 研究内容
第2章 一个黄瓜花叶病毒新寄主的发现
    2.1 前言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 主要试剂配方
        2.2.3 主要仪器设备和生物信息学软件
        2.2.4 摩擦接种实验
        2.2.5 dsRNA的提取和进一步纯化
        2.2.6 dsRNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和银染
        2.2.7 dsRNA的 DOP-PCR扩增
        2.2.8 DOP-PCR产物的克隆和序列鉴定
        2.2.9 黄瓜花叶病毒萝藦分离物的全基因组序列扩增
        2.2.10 RT-PCR检测
        2.2.11 进化树的构建
    2.3 结果
        2.3.1 摩擦接种
        2.3.2 萝藦叶中提取的dsRNA的PAGE电泳
        2.3.3 dsRNA的 DOP-PCR扩增和测序分析
        2.3.4 黄瓜花叶病毒萝藦分离物的全基因组序列扩增
        2.3.5 RT-PCR
        2.3.6 进化树的构建
    2.4 讨论
第3章 CMV-Fny RNA3 基因间隔区的功能
    3.1 前言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 重要试剂的配制
        3.2.3 近RNA4 转录起始位点的预测
        3.2.4 突变体表达载体的构建
        3.2.5 转化农杆菌
        3.2.6农杆菌注射接种实验
        3.2.7 总蛋白的SDS-PAGE
        3.2.8 外壳蛋白的Western blot检测
        3.2.9 RNA3和RNA4的Northern blot检测
        3.2.10 半定量RT-PCR
    3.3 结果
        3.3.1 突变体表达载体的构建
        3.3.2 转化野生型RNA3 和缺失突变体的农杆菌的鉴定
        3.3.3 农杆菌注射接种本氏烟的症状观察
        3.3.4 外壳蛋白的Western blot检测
        3.3.5 探针的制备
        3.3.6 Northern blot检测结果
        3.3.7 半定量RT-PCR
    3.4 讨论
结论
参考文献
附录
    附录1 ：CMV-Met全基因组序列扩增的引物设计示意图
    附录2 ：分离胶和浓缩胶的配方
    附录3 ：中英文缩略表
攻读硕士学位期间发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]利用弱病毒载体表达PvSR2基因降低烟草植株重金属镉含量的研究[D]. 王强.湖南人文科技学院 2016
[2]黄瓜花叶病毒生物学特性及分子变异研究[D]. 程朝玲.石河子大学 2013
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本文编号：3081368