利用CRISPR/Cas9技术构建表达鲤长链脂肪酸延长酶5基因（Elovl5）的转基因斑马鱼

发布时间：2021-03-16 03:32

　　CRISPR/Cas9技术广泛应用于基因敲除,利用敲入包含荧光蛋白和目标基因的片段,有助于早期筛选实验动物。长链脂肪酸延长酶5 （elongation of very long chain fatty acids 5, Elovl5）是鱼类调控高不饱和脂肪酸合成的关键酶之一。为在斑马鱼（Danio rerio）研究鲤（Cyprinus carpio） Elovl5活性,本研究构建包含Tol2序列、斑马鱼短链肌球蛋白2基因（myosin light chain 2, Mylz2）启动子、红色荧光蛋白基因（red fluorescence gene, DsRed2）、斑马鱼Elovl5启动子、鲤Elovl5基因、2A剪切肽和绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）的载体,扩增获得一段长7.5 kb的片段。利用CRISPR/Cas9方法,将此片段敲入斑马鱼基因组。敲入成功的斑马鱼在受精72 h后开始于肌肉显红色荧光。对利用红色荧光筛选敲入成功的斑马鱼,进一步用PCR扩增DsRed2予以确证。在存活斑马鱼中,基因敲入阳性率为28.7%。相... 

【文章来源】：农业生物技术学报. 2020,28(07)北大核心

【文章页数】：12 页

【部分图文】：

阴性对照质粒(A)和实验质粒(B)示意图

野生组红色荧光蛋白PCR扩增Figure 4 PCR amplification of DsRed2 i

Tol2阴性对照组红色荧光蛋白PCR扩增


本文编号：3085329