肿瘤转移抑制基因LASS2/TMSG1全长及其截短体对人前列腺癌细胞生物功能的影响

发布时间：2021-03-22 07:39

　　目的构建肿瘤转移抑制基因LASS2/TMSG1全长及其截短体质粒,探讨其对人前列腺癌细胞生长、迁移、侵袭等生物学功能的影响。方法构建LASS2/TMSG1基因全长以及3个截短体的慢病毒质粒（pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro）,并将其稳定转染到人前列腺癌细胞系PC-3M-1E8中,采用Western blot法鉴定稳定转染的效果;然后采用软琼脂集落形成实验、细胞划痕修复试验、Transwell体外侵袭实验等分析LASS2/TMSG1基因全长以及3个截短体对人前列腺癌细胞系PC-3M-1E8生物学功能的影响。结果 LASS2/TMSG1蛋白和缺失Homeobox（Hox）结构域的截短蛋白,可以有效抑制PC-3M-1E8细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P均<0.001）;缺失TLC结构域的LASS2/TMSG1蛋白则丧失抑制前列腺癌细胞生长的功能。结论 LASS2/TMSG1蛋白的TLC结构域是抑制前列腺癌细胞生长的关键功能域。 

【文章来源】：临床与实验病理学杂志. 2020,36(07)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

LASS2基因全长以及3个截短体序列示意图

以LASS2/TMSG1-pcDNA3.0质粒为模板,采用非依赖DNA连接酶的连接方法构建慢病毒质粒系统,其中,T1截短体全长972 bp,T2截短体全长534 bp,T3截短体全长1 114 bp,LASS2全长1 143 bp(图2A)。随后,采用慢病毒感染人前列腺癌高转移潜能细胞系PC-3M-1E8(LASS2/TMSG1低表达),并利用慢病毒质粒系统所带有的嘌呤霉素抗性基因进行筛选,得到稳定细胞系后再采用Western blot法进行检测,实验结果显示,LASS2/TMSG1全长蛋白分子质量在(4.0～5.0)×104之间(实际分子质量为4.5×104),T1截短体蛋白分子质量在(3.5～4.0)×104之间,T2截短体蛋白分子质量在(1.5～2.5)×104之间,T3截短体蛋白分子质量在(4.0～5.0)×104之间(图2B)。与预测的分子质量相符合:T1截短体蛋白分子质量35.64×103,T2截短体蛋白分子质量19.58×103,T3截短体蛋白分子质量40.85×103。2.2 人前列腺癌细胞系PC-3M-1E8中LASS2基因全长以及3个截短体蛋白的分布

本组构建的T2截短体就特异性的删除了LASS2基因的TLC结构域。根据实验结果显示,T2截短体对人前列腺癌细胞系PC-3M-1E8细胞的影响具有双重性。稳定转染了LASS2基因T2截短体序列的人前列腺癌细胞系PC-3M-1E8细胞的增殖、迁移、侵袭均受显著抑制(P均<0.001),在细胞凋亡方面以及非锚定依赖性生长方面并无明显改变,但在锚定依赖性生长(P<0.001)方面却显著增强。其中涉及的具体机制可能并不只限于神经酰胺所参与的信号通路,具体机制还有待分析。图4 A.软琼脂集落形成实验检测各稳定细胞系非锚定依赖性生长能力;B.在软琼脂集落形成实验中各稳定细胞系形成的克隆数统计结果;C.在软琼脂集落形成实验中各稳定细胞系形成的克隆直径统计结果;

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3093895