EphB6基因甲基化在胃癌中的调控作用的研究
发布时间：2021-03-29 04:55
研究背景和目的胃癌（Gastric Cancer,GC）是我国常见恶性肿瘤,尽管近年来在胃癌的诊断和治疗上取得一定进步,但我国GC的发病率与死亡率仍位居前列。从分子层面上探究胃癌发生、发展将有助于寻找到新的治疗突破点。EphB6是酪氨酸激酶（receptor tyrosine kinases,RTKs）家族中一种缺乏酪氨酸激酶活性的特殊型受体。目前国内外大量研究提示EphB6在大部分肿瘤中呈现低表达,可能发挥着抑癌基因功能。但是EphB6在胃癌中的研究尚少,本课题前期通过对胃癌患者外周血样本ctDNA高通量测序,发现多例EphB6基因高频突变。基于前期研究,我们以胃癌为研究对象,将EphB6作为目的基因,明确EphB6在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达,探究可能影响EphB6基因表达的机制;构建EphB6稳定过表达的胃癌细胞株,观察其对胃癌细胞增殖、侵袭转移的影响,并初步探索相关分子机制。研究方法1.运用公共数据库生物信息网站及免疫组化技术研究胃癌组织及对应的癌旁正常组织EphB6表达情况并进一步分析EphB6蛋白表达水平与患者临床病理参数的关系。2.应用RT-PCR、Westernblo...
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【图文】：
GEPIA网站分析在人胃癌细胞组织中EphB6mRNA水平
20图1.2EphB6蛋白在胃癌组织中的免疫组化染色情况（A）EphB6蛋白在癌旁组织高表达；（B）EphB6蛋白在癌组织低表达；（C）EphB6蛋白在癌组织中等表达；（D）EphB6蛋白在癌组织高表达。（×100）表1.1胃癌组织EphB6蛋白染色评分情况(x±s)组织类型综合评分t值P值癌组织2.2895±1.575284.717<0.001癌旁组织3.9474±1.558713.3EphB6蛋白的表达与患者临床数据的关系将38例胃癌组织及对应的癌旁正常组织的EphB6染色综合评分进行比较，25例（65.8%）出现了EphB6蛋白表达下调，未下调的仅13例（34.2%，其中11例无变化，2例表达上调）。将EphB6蛋白表达的下调与患者临床病理参数的关系进行统计学分析。结果如表1.2所示，EphB6蛋白表达下调与胃癌分化程度（P=0.042<0.05）、有无脉管癌栓（P=0.013<0.05）有相关性，但与患者性别（P=0.486）、年龄（P=0.323）、肿瘤
29（9）取1μgRNA于1﹪琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA的完整性。当显示18s、28s和5s三条扩增带，亦说明提取的RNA完整性好，结果见下图图2.1RNA电泳图2.2.2cDNA第一链的合成（1）按北京天根逆转录试剂盒说明书操作，配制gDNA去除反应体系，彻底混匀。简短离心，并置于42℃，孵育3min。然后置于冰上放置；组分使用量TotalRNA1μg5×gDNABuffer2μlRNaseFreedH2OUpto10μl（2）配制反转录反应体系；组分使用量10×FastRTBuffer2μlRTEnzymeMix1μlFQ-RTPrimerMix2μlRNaseFreedH2OUpto10μl（3）将反转录反应中的Mix，加到gDNA去除步骤的反应液中，充分混匀；（4）反应条件：42℃孵育15min，95℃孵育3min之后放于冰上，得到cDNA可用于后续实验。2.2.3qPCR引物设计与合成
【参考文献】：
期刊论文
[1]Eph-Ephrin信号通路双向调节功能与胃癌的研究进展[J]. 王海洋,夏化文,王葆春. 海南医学. 2017(17)
[2]表观遗传学研究进展[J]. 丁勇,许超,吴季辉,施蕴渝,臧建业,蔡刚. 中国科学:生命科学. 2017(01)
[3]表观遗传学与疾病发生发展的研究进展[J]. 王琳. 世界最新医学信息文摘. 2016(53)
[4]Methylation-mediated gene silencing as biomarkers of gastric cancer:a review[J]. Jun Nakamura,Tomokazu Tanaka,Yoshihiko Kitajima,Hirokazu Noshiro,Kohji Miyazaki. World Journal of Gastroenterology. 2014(34)
[5]Eph受体家族与肿瘤及肿瘤血管的相关性研究进展[J]. 傅明杰,邢雪. 临床普外科电子杂志. 2014(02)
[6]DNA甲基化及其调控与肿瘤[J]. 汪炎,牛朝诗. 国际病理科学与临床杂志. 2013(05)
[7]CpG岛甲基化和人类肿瘤[J]. 徐国茂. 中国药业. 2008(09)
本文编号：3106940
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【图文】：
GEPIA网站分析在人胃癌细胞组织中EphB6mRNA水平
20图1.2EphB6蛋白在胃癌组织中的免疫组化染色情况（A）EphB6蛋白在癌旁组织高表达；（B）EphB6蛋白在癌组织低表达；（C）EphB6蛋白在癌组织中等表达；（D）EphB6蛋白在癌组织高表达。（×100）表1.1胃癌组织EphB6蛋白染色评分情况(x±s)组织类型综合评分t值P值癌组织2.2895±1.575284.717<0.001癌旁组织3.9474±1.558713.3EphB6蛋白的表达与患者临床数据的关系将38例胃癌组织及对应的癌旁正常组织的EphB6染色综合评分进行比较，25例（65.8%）出现了EphB6蛋白表达下调，未下调的仅13例（34.2%，其中11例无变化，2例表达上调）。将EphB6蛋白表达的下调与患者临床病理参数的关系进行统计学分析。结果如表1.2所示，EphB6蛋白表达下调与胃癌分化程度（P=0.042<0.05）、有无脉管癌栓（P=0.013<0.05）有相关性，但与患者性别（P=0.486）、年龄（P=0.323）、肿瘤
29（9）取1μgRNA于1﹪琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA的完整性。当显示18s、28s和5s三条扩增带，亦说明提取的RNA完整性好，结果见下图图2.1RNA电泳图2.2.2cDNA第一链的合成（1）按北京天根逆转录试剂盒说明书操作，配制gDNA去除反应体系，彻底混匀。简短离心，并置于42℃，孵育3min。然后置于冰上放置；组分使用量TotalRNA1μg5×gDNABuffer2μlRNaseFreedH2OUpto10μl（2）配制反转录反应体系；组分使用量10×FastRTBuffer2μlRTEnzymeMix1μlFQ-RTPrimerMix2μlRNaseFreedH2OUpto10μl（3）将反转录反应中的Mix，加到gDNA去除步骤的反应液中，充分混匀；（4）反应条件：42℃孵育15min，95℃孵育3min之后放于冰上，得到cDNA可用于后续实验。2.2.3qPCR引物设计与合成
【参考文献】：
期刊论文
[1]Eph-Ephrin信号通路双向调节功能与胃癌的研究进展[J]. 王海洋,夏化文,王葆春. 海南医学. 2017(17)
[2]表观遗传学研究进展[J]. 丁勇,许超,吴季辉,施蕴渝,臧建业,蔡刚. 中国科学:生命科学. 2017(01)
[3]表观遗传学与疾病发生发展的研究进展[J]. 王琳. 世界最新医学信息文摘. 2016(53)
[4]Methylation-mediated gene silencing as biomarkers of gastric cancer:a review[J]. Jun Nakamura,Tomokazu Tanaka,Yoshihiko Kitajima,Hirokazu Noshiro,Kohji Miyazaki. World Journal of Gastroenterology. 2014(34)
[5]Eph受体家族与肿瘤及肿瘤血管的相关性研究进展[J]. 傅明杰,邢雪. 临床普外科电子杂志. 2014(02)
[6]DNA甲基化及其调控与肿瘤[J]. 汪炎,牛朝诗. 国际病理科学与临床杂志. 2013(05)
[7]CpG岛甲基化和人类肿瘤[J]. 徐国茂. 中国药业. 2008(09)
本文编号：3106940
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3106940.html
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