2个棉花抗黄萎病相关基因的克隆及功能分析
发布时间：2021-03-29 07:18
棉花是我国重要的经济作物之一,是天然纤维和棉籽油的重要来源。近年来,黄萎病已经成为棉花生产中最具毁灭性的病害,对棉花产量和纤维品质构成严重威胁。利用分子生物学和基因工程的方法,挖掘抗病相关基因,为棉花抗病育种提供了新途径。本研究基于课题组构建的黄萎病诱导的转录组数据库,从中筛选出与棉花抗黄萎病相关的2个差异表达基因。通过病毒诱导的基因沉默（VIGS）、转基因等手段验证其在植物抗黄萎病中的功能,为棉花抗病育种提供帮助。利用同源克隆的方法,从海岛棉海7124中克隆了GbVIP1基因。测序结果表明该基因ORF序列全长1014 bp,编码337个氨基酸,是一种亲水性不稳定蛋白质。生物信息学分析显示GbVIP1蛋白包含保守的bZIP结构域,是一个bZIP转录因子。组织表达特异性分析表明VIP1基因在棉花根部组织的表达量最高。对不同棉花材料接菌处理,发现抗病棉花材料中的VIP1基因显著上调表达。利用激素喷洒处理棉花叶片,结果显示VIP1基因受外源激素ET的诱导显著上调表达,这说明GbVIP1基因的表达可能与ET有关。利用VIGS技术在棉花中沉默GbVIP1基因,用黄萎病菌处理植株后,沉默目的基因的...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
VIP1蛋白激活病程相关基因PR1表达的过程（Zaltsmanetal.,2010）
中国农业科学院硕士学位论文 第二章 棉花GbVIP1 基因的克隆和分子特性分析5 s，60℃ 34 s，reps 40；Stage 3：Melt Curve。实验的数据处理采用 2-△△Ct的方法（Livak et al., 2001）进行相对定量分析，公式如下所示：F=2-[待测组目的基因 Ct 值-待测组管家基因（内参基因）Ct 值]-[待测组目的基因 Ct 值-待测组管家基因（内参基因）Ct 值]2.3 实验结果2.3.1 基因的克隆2.3.1.1 RNA 的检测使用试剂盒提取样品 RNA，用 1 %琼脂糖凝胶检测 RNA 提取质量，在凝胶成像系统中可以看到清晰的 28S 和 18S 两条带。使用 NanoDrop 2000 检测提取的 RNA 浓度与质量，OD260/ OD280均在 1.8~2.2 间，证明提取的 RNA 质量较好，符合基本的实验要求，可以用于后续的 cDNA 合成等实验。
图 2-1 RNA 电泳图Figure 2-1 Elctrophoregram of RNA隆A 为模板扩增目的片段基因，使用 1 %的琼的片段，与估测的片段长度相符，说明成 ORF 全长 1014 bp。
【参考文献】：
期刊论文
[1]棉花黄萎病研究进展[J]. 林玲,张昕,邓晟. 棉花学报. 2014(03)
[2]棉花黄萎病的发生与防治[J]. 王保勤,李宾,贾新合,刘书梅,邱元富,赵天玉. 农业科技通讯. 2013(04)
[3]蛋白质磷酸化修饰研究进展[J]. 梁前进,王鹏程,白燕荣. 科技导报. 2012(31)
[4]棉花抗黄萎病机制研究进展[J]. 徐理,朱龙付,张献龙. 作物学报. 2012(09)
[5]OsVIP1 RNAi转基因水稻植株的构建[J]. 娄丽娟,史雪,罗美中. 华中农业大学学报. 2012(02)
[6]植物bZIP转录因子的生物学功能[J]. 张计育,渠慎春,郭忠仁,杜小丽,都贝贝,章镇. 西北植物学报. 2011(05)
[7]棉花枯萎病黄萎病的发生与防治[J]. 李素洁. 现代农村科技. 2011(07)
[8]棉花黄萎病及其抗病育种的研究[J]. 丁笑生,于广丽. 生物技术. 2005(01)
[9]棉花黄萎病防治策略[J]. 简桂良,卢美光,仇家山,王凤行,张洪成. 中国植保导刊. 2004(04)
[10]棉花黄萎病及其抗性育种研究进展[J]. 景忆莲,刘耀斌,范万法,校百才. 西北农业学报. 1999(03)
博士论文
[1]棉花组织诱导体系中大丽轮枝菌分泌蛋白分析及其致病性研究[D]. 肖红利.中国农业科学院 2014
[2]陆地棉抗黄萎病相关基因筛选及功能验证[D]. 张文蔚.中国农业科学院 2013
[3]棉花黄萎病菌诱导陆地棉和野生棉差异表达分析及抗病相关基因克隆[D]. 赵付安.河南大学 2012
[4]海岛棉LRR-TM类抗病基因GbaVd1和GbaVd2的克隆与功能研究[D]. 陈捷胤.中国农业科学院 2010
[5]拟南芥耐低硫突变体高通量筛选的建立和鉴定[D]. 吴宇.中国科学技术大学 2010
硕士论文
[1]棉花抗黄萎病基因GhERF的功能分析和抗黄萎病相关基因GhHRGP的转化研究[D]. 翁宇.中国农业科学院 2008
[2]棉花黄萎病菌致病力分化测定及其致萎毒素研究[D]. 张慧霞.西北农林科技大学 2008
本文编号：3107158
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
VIP1蛋白激活病程相关基因PR1表达的过程（Zaltsmanetal.,2010）
中国农业科学院硕士学位论文 第二章 棉花GbVIP1 基因的克隆和分子特性分析5 s，60℃ 34 s，reps 40；Stage 3：Melt Curve。实验的数据处理采用 2-△△Ct的方法（Livak et al., 2001）进行相对定量分析，公式如下所示：F=2-[待测组目的基因 Ct 值-待测组管家基因（内参基因）Ct 值]-[待测组目的基因 Ct 值-待测组管家基因（内参基因）Ct 值]2.3 实验结果2.3.1 基因的克隆2.3.1.1 RNA 的检测使用试剂盒提取样品 RNA，用 1 %琼脂糖凝胶检测 RNA 提取质量，在凝胶成像系统中可以看到清晰的 28S 和 18S 两条带。使用 NanoDrop 2000 检测提取的 RNA 浓度与质量，OD260/ OD280均在 1.8~2.2 间，证明提取的 RNA 质量较好，符合基本的实验要求，可以用于后续的 cDNA 合成等实验。
图 2-1 RNA 电泳图Figure 2-1 Elctrophoregram of RNA隆A 为模板扩增目的片段基因，使用 1 %的琼的片段，与估测的片段长度相符，说明成 ORF 全长 1014 bp。
【参考文献】：
期刊论文
[1]棉花黄萎病研究进展[J]. 林玲,张昕,邓晟. 棉花学报. 2014(03)
[2]棉花黄萎病的发生与防治[J]. 王保勤,李宾,贾新合,刘书梅,邱元富,赵天玉. 农业科技通讯. 2013(04)
[3]蛋白质磷酸化修饰研究进展[J]. 梁前进,王鹏程,白燕荣. 科技导报. 2012(31)
[4]棉花抗黄萎病机制研究进展[J]. 徐理,朱龙付,张献龙. 作物学报. 2012(09)
[5]OsVIP1 RNAi转基因水稻植株的构建[J]. 娄丽娟,史雪,罗美中. 华中农业大学学报. 2012(02)
[6]植物bZIP转录因子的生物学功能[J]. 张计育,渠慎春,郭忠仁,杜小丽,都贝贝,章镇. 西北植物学报. 2011(05)
[7]棉花枯萎病黄萎病的发生与防治[J]. 李素洁. 现代农村科技. 2011(07)
[8]棉花黄萎病及其抗病育种的研究[J]. 丁笑生,于广丽. 生物技术. 2005(01)
[9]棉花黄萎病防治策略[J]. 简桂良,卢美光,仇家山,王凤行,张洪成. 中国植保导刊. 2004(04)
[10]棉花黄萎病及其抗性育种研究进展[J]. 景忆莲,刘耀斌,范万法,校百才. 西北农业学报. 1999(03)
博士论文
[1]棉花组织诱导体系中大丽轮枝菌分泌蛋白分析及其致病性研究[D]. 肖红利.中国农业科学院 2014
[2]陆地棉抗黄萎病相关基因筛选及功能验证[D]. 张文蔚.中国农业科学院 2013
[3]棉花黄萎病菌诱导陆地棉和野生棉差异表达分析及抗病相关基因克隆[D]. 赵付安.河南大学 2012
[4]海岛棉LRR-TM类抗病基因GbaVd1和GbaVd2的克隆与功能研究[D]. 陈捷胤.中国农业科学院 2010
[5]拟南芥耐低硫突变体高通量筛选的建立和鉴定[D]. 吴宇.中国科学技术大学 2010
硕士论文
[1]棉花抗黄萎病基因GhERF的功能分析和抗黄萎病相关基因GhHRGP的转化研究[D]. 翁宇.中国农业科学院 2008
[2]棉花黄萎病菌致病力分化测定及其致萎毒素研究[D]. 张慧霞.西北农林科技大学 2008
本文编号：3107158
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