皮肤黑色素瘤放疗耐药基因的筛选及初步鉴定

发布时间：2021-03-29 16:36

　　目的筛选出皮肤恶性黑色素瘤放疗敏感性基因,并在生物信息学和细胞水平验证筛选出的候选基因对皮肤恶性黑色素瘤发生、发展的作用。方法通过全转录组测序及表达谱分析比较野生型人皮肤黑色素瘤细胞SK-MEL-1与辐射耐受型SK-MEL-1的差异基因,以表达量差异最大的基因作为候选基因。TCGA数据库挖掘该候选基因在皮肤恶性黑色素瘤中的表达特征及其对预后的影响。进一步通过构建该基因的敲低、过表达SK-MEL-1细胞株,比较敲低、过表达该基因的细胞对SK-MEL-1细胞增殖、辐射敏感性的影响。结果通过比较野生型SK-MEL-1与辐射耐受型SK-MEL-1的表达谱,筛选出CDCA8基因为差异表达量最大的基因。该基因在辐射耐受型SK-MEL-1中表达上调。基于TCGA数据库的生物信息学分析提示,该基因在皮肤恶性黑色素瘤中高表达,且表达量与临床分期相关,临床分期高的样本表达量高于低临床分期的样本。此外,高表达组的总生存率和无病生存率均低于低表达组。细胞学水平实验证明,敲低CDCA8基因能明显抑制SK-MEL-1的增殖和提高SK-MEL-1对辐射的敏感性;相反,过表达CDCA8基因能促进SK-MEL-1的增殖... 

【文章来源】：西南国防医药. 2020,30(09)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

SK-MEL-1细胞与RR-SK-MEL-1细胞差异表达火山

为进一步验证上述筛选出的CDCA8基因对皮肤黑色素瘤的影响。本研究通过构建CDCA8敲低、过表达SK-MEL-1细胞株，进一步探究CDCA8表达对SK-MEL-1细胞株生物学功能的影响。Western blot试验检测WT-SK-MEL-1、KD-SK-MEL-1和OE-SK-MEL-1细胞的CDCA8蛋白表达水平。结果见图3A，与WT-SK-MEL-1对比，KD-SK-MEL-1组的CDCA8蛋白表达量明显降低，而OE-SK-MEL-1组的CDCA8蛋白表达量则明显上升。以GAPDH蛋白为对照，对3次独立试验的结果做半定量分析。KD-SK-MEL-1组（0.12±0.01）和OE-SK-MEL-1组（8.43±0.90）与WT-SK-MEL-1组（1.23±0.32）间CDCA8蛋白表达量差异有统计学意义（P<0.01）。结果提示，CDCA8敲低、过表达的SK-MEL-1细胞系构建成功。图3 CDCA8敲低、过表达SK-MEL-1细胞株CDCA8蛋白表达量检测

CDCA8敲低、过表达SK-MEL-1细胞株CDCA8蛋白表达量检测

【参考文献】：
期刊论文
[1]皮肤黑色素瘤流行病学及防治研究进展[J]. 林千里,张文俊,汪汇,江华.  中国医药导报. 2019(03)
[2]蓬乱蛋白2干扰和过表达慢病毒载体的构建及其在hUVECs中的表达[J]. 生欣,王俊华,刘月华,郜双林,谢夏丹,范芳.  中国现代医学杂志. 2019(01)
[3]泛素羧基末端水解酶L5对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响[J]. 丁芳,马建林,吴晓巍,刘芝华.  中华肿瘤杂志. 2018 (12)
[4]黑色素瘤治疗新进展[J]. 战雪林,张瑜娟,闵卫平.  南昌大学学报(医学版). 2018(05)
[5]进展期皮肤恶性黑色素瘤治疗现状[J]. 金谷,李涛.  现代医药卫生. 2018(04)
[6]辐射诱导辐射耐受鳞癌细胞株的建立及其生物学特性[J]. 骆志国,周福祥,周云峰,代静,谢丛华,刘诗权.  中华放射肿瘤学杂志. 2005(03)



本文编号：3107841