DEAD-box解螺旋酶46基因沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响
发布时间：2021-04-01 05:17
目的分析短发夹RNA（shRNA）介导DEAD-box解螺旋酶46（DDX46）基因沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量逆转录PCR（RT-qPCR）和蛋白质印迹法（Western Blot）测定人正常乳腺上皮细胞系和乳腺癌细胞系中DDX46表达差异。以慢病毒介导的shRNA敲低乳腺癌SK-BR-3细胞中DDX46的表达,实验分为空白对照组、阴性对照组和sh-DDX46组。RT-qPCR检测各组细胞DDX46 mRNA的表达水平,蛋白质印迹法检测DDX46蛋白和凋亡相关蛋白的表达水平,克隆形成和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）检测细胞生长增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 DDX46mRNA在各乳腺癌细胞系中的表达量均高于正常乳腺上皮细胞（P<0.05）。sh-DDX46组细胞DDX46 mRAN和蛋白表达水平均明显低于空白对照组和阴性对照组（P<0.05）。sh-DDX46组的细胞生长增殖能力明显低于两对照组（P<0.05）。空白对照组、阴性对照组和sh-DDX46组SK-BR-3细胞凋亡率分别为（4.21±1.65）%、（5.36±1....
【文章来源】：安徽医药. 2020,24(12)
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
蛋白质印迹法检测DEAD-box解螺旋酶46(DDX46）蛋白的表达水平
DDX46与结直肠癌、食管癌、骨肉瘤等恶性肿瘤细胞的增殖和凋亡相关。Li Ming等[8]的研究表明87%的结直肠腺癌病人核DDX46染色水平较高，与癌旁组织相比，结直肠癌组织中DDX46蛋白表达明显增加。用DDX46 RNAi慢病毒沉默人结肠癌细胞中DDX46在的表达后，MTT及克隆形成实验检测细胞生长增殖明显减少，DDX46沉默通过增加cleaved Caspase-3和cleaved PARP的表达导致凋亡诱导，DDX46对结直肠癌细胞增殖至关重要，是结直肠癌治疗的潜在治疗靶点。Li Bin等[10]、李斌等[18]通过sh RNA干扰技术靶向沉默食管癌TE-1细胞DDX46表达，沉默DDX46可通过下调Akt/NF-κB信号转导通路抑制肿瘤细胞增殖，诱导细胞凋亡。另有研究报道DDX46可通过调节的骨肉瘤Sa OS2细胞中PI3K和Akt的磷酸化水平，影响骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和体内肿瘤的生长[11]。与上述研究类似，本研究参考张淑芳等[14]的实验方法，通过慢病毒sh RNA转染乳腺癌SK-BR-3细胞，建立稳定细胞系，细胞克隆形成实验和MTT实验检测表明沉默DDX46表达可显著抑制乳腺癌细胞的增殖和生长，流式细胞术检测发现DDX46基因沉默后乳腺癌细胞凋亡率明显增加。凋亡是细胞维持内环境稳定的重要方式，也是肿瘤细胞死亡的主要方式[19-20]。本研究应用蛋白质印迹法对凋亡通路蛋白进行检测发现，沉默DDX46后可诱导凋亡通路中的抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调，促凋亡蛋白Bax表达增强，同时凋亡关键蛋白Cleaved Caspase-3表达上调，提示沉默DDX46可能通过调节凋亡通路蛋白的表达诱导乳腺癌细胞凋亡。
综上所述，本研究结果表明DDX46在乳腺癌细胞系中高表达，沉默DDX46表达可抑制乳腺癌细胞的增殖，并通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved Caspase-3的表达促进细胞凋亡，凋亡信号通路可能是其作用机制之一。本研究不足之处在于只选用一种人乳腺癌细胞系，且只在细胞层面初步探讨了DDX46的作用，在今后的研究中我们会对上述问题进行进一步研究，增加动物实验及临床预后分析，并对其相关作用机制进行深入探讨。
【参考文献】：
期刊论文
[1]乳腺癌外科治疗研究现状及热点[J]. 王海波,吕志栋. 中华实验外科杂志. 2019 (05)
[2]短发卡RNA干扰乳脂球表皮生长因子-8基因慢病毒载体构建及其对乳腺癌细胞干扰的影响[J]. 杨泳,李杰宝,宋旗,张家衡. 中华实验外科杂志. 2019 (05)
[3]结直肠癌DDX46蛋白表达及其与C-erbB-2、Ki-67、p53和nm23蛋白表达的相关性[J]. 黄培,钱红英,孙屏,张熔熔,赵帆,陈义钢. 肿瘤研究与临床. 2019 (02)
[4]保乳治疗乳腺癌患者临床病理特征与预后的相关性[J]. 刘铭,张明军,杨育才,邵菲,王慧. 安徽医学. 2019(01)
[5]泛素羧基末端水解酶L5对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响[J]. 丁芳,马建林,吴晓巍,刘芝华. 中华肿瘤杂志. 2018 (12)
[6]TPX2对人肺癌细胞增殖、凋亡及cleavedcaspase-3表达的影响[J]. 杨忠信,黄志昂,潘丽红,李晓宇,郑先杰,张双林. 中华解剖与临床杂志. 2018(02)
[7]DDX46基因慢病毒载体的构建及其在人膀胱癌细胞中的表达[J]. 刘熹,张冲,黄邓高,曹卉,高元慧,张淑芳,彭大为. 安徽医学. 2018(01)
[8]靶向沉默DDX46基因对食管鳞癌TE-1细胞增殖及凋亡的影响[J]. 李斌,朱多杰,何雯婷,刘涛,王成,宋铁牛,杨建宝,郭权威,蒋鹏,魏小平,孟于琪. 中国胸心血管外科临床杂志. 2017(06)
本文编号：3112740
【文章来源】：安徽医药. 2020,24(12)
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
蛋白质印迹法检测DEAD-box解螺旋酶46(DDX46）蛋白的表达水平
DDX46与结直肠癌、食管癌、骨肉瘤等恶性肿瘤细胞的增殖和凋亡相关。Li Ming等[8]的研究表明87%的结直肠腺癌病人核DDX46染色水平较高，与癌旁组织相比，结直肠癌组织中DDX46蛋白表达明显增加。用DDX46 RNAi慢病毒沉默人结肠癌细胞中DDX46在的表达后，MTT及克隆形成实验检测细胞生长增殖明显减少，DDX46沉默通过增加cleaved Caspase-3和cleaved PARP的表达导致凋亡诱导，DDX46对结直肠癌细胞增殖至关重要，是结直肠癌治疗的潜在治疗靶点。Li Bin等[10]、李斌等[18]通过sh RNA干扰技术靶向沉默食管癌TE-1细胞DDX46表达，沉默DDX46可通过下调Akt/NF-κB信号转导通路抑制肿瘤细胞增殖，诱导细胞凋亡。另有研究报道DDX46可通过调节的骨肉瘤Sa OS2细胞中PI3K和Akt的磷酸化水平，影响骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和体内肿瘤的生长[11]。与上述研究类似，本研究参考张淑芳等[14]的实验方法，通过慢病毒sh RNA转染乳腺癌SK-BR-3细胞，建立稳定细胞系，细胞克隆形成实验和MTT实验检测表明沉默DDX46表达可显著抑制乳腺癌细胞的增殖和生长，流式细胞术检测发现DDX46基因沉默后乳腺癌细胞凋亡率明显增加。凋亡是细胞维持内环境稳定的重要方式，也是肿瘤细胞死亡的主要方式[19-20]。本研究应用蛋白质印迹法对凋亡通路蛋白进行检测发现，沉默DDX46后可诱导凋亡通路中的抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调，促凋亡蛋白Bax表达增强，同时凋亡关键蛋白Cleaved Caspase-3表达上调，提示沉默DDX46可能通过调节凋亡通路蛋白的表达诱导乳腺癌细胞凋亡。
综上所述，本研究结果表明DDX46在乳腺癌细胞系中高表达，沉默DDX46表达可抑制乳腺癌细胞的增殖，并通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved Caspase-3的表达促进细胞凋亡，凋亡信号通路可能是其作用机制之一。本研究不足之处在于只选用一种人乳腺癌细胞系，且只在细胞层面初步探讨了DDX46的作用，在今后的研究中我们会对上述问题进行进一步研究，增加动物实验及临床预后分析，并对其相关作用机制进行深入探讨。
【参考文献】：
期刊论文
[1]乳腺癌外科治疗研究现状及热点[J]. 王海波,吕志栋. 中华实验外科杂志. 2019 (05)
[2]短发卡RNA干扰乳脂球表皮生长因子-8基因慢病毒载体构建及其对乳腺癌细胞干扰的影响[J]. 杨泳,李杰宝,宋旗,张家衡. 中华实验外科杂志. 2019 (05)
[3]结直肠癌DDX46蛋白表达及其与C-erbB-2、Ki-67、p53和nm23蛋白表达的相关性[J]. 黄培,钱红英,孙屏,张熔熔,赵帆,陈义钢. 肿瘤研究与临床. 2019 (02)
[4]保乳治疗乳腺癌患者临床病理特征与预后的相关性[J]. 刘铭,张明军,杨育才,邵菲,王慧. 安徽医学. 2019(01)
[5]泛素羧基末端水解酶L5对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响[J]. 丁芳,马建林,吴晓巍,刘芝华. 中华肿瘤杂志. 2018 (12)
[6]TPX2对人肺癌细胞增殖、凋亡及cleavedcaspase-3表达的影响[J]. 杨忠信,黄志昂,潘丽红,李晓宇,郑先杰,张双林. 中华解剖与临床杂志. 2018(02)
[7]DDX46基因慢病毒载体的构建及其在人膀胱癌细胞中的表达[J]. 刘熹,张冲,黄邓高,曹卉,高元慧,张淑芳,彭大为. 安徽医学. 2018(01)
[8]靶向沉默DDX46基因对食管鳞癌TE-1细胞增殖及凋亡的影响[J]. 李斌,朱多杰,何雯婷,刘涛,王成,宋铁牛,杨建宝,郭权威,蒋鹏,魏小平,孟于琪. 中国胸心血管外科临床杂志. 2017(06)
本文编号：3112740
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