Satb2基因慢病毒载体的构建及其鉴定

发布时间：2021-04-05 01:38

　　目的构建特殊富含AT序列结合蛋白2 （Satb2）基因慢病毒表达载体并通过感染293T细胞检测目的基因的表达。方法采用PCR技术扩增目的基因Satb2,并在目的基因的上下游分别添加酶切位点PacⅠ和AscⅠ,将其PCR产物和目的载体用PacⅠ和AscⅠ分别进行双酶切,通过T4DNA ligase连接酶切后的PCR产物及目的载体,构建pLenti6.3-Satb2-IRES-EGFP慢病毒表达载体,通过菌液PCR、酶切及测序鉴定其结果;将阳性克隆质粒与包装质粒Mix共转染293T细胞,收集、浓缩病毒液并测定其浓度;将重组病毒液感染293T细胞,观察其荧光表达情况,通过q PCR检测目的基因表达。结果菌液PCR结果得到一条约2 202 bp的亮带,与目的基因大小相符;重组载体经过双酶切得到一条9.1 kb大片段及一条2 202 bp小片段;通过测序验证重组载体中Satb2基因序列与GenBank报道的序列完全一致,表明慢病毒表达载体构建成功。经过包装,重组慢病毒滴度达到7.9×107ifu/mL,该病毒液感染293T细胞后可观察到大量荧光,感染率约为70%,通过qPCR检测结果显示实验组S... 

【文章来源】：海南医学. 2020,31(23)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

p Lenti6.3-Satb2-IRES-EGFP重组载体菌落PCR鉴定

p Lenti6.3-Satb2-IRES-EGFP酶切鉴定

将菌落PCR和酶切鉴定结果均呈阳性的重组慢病毒载体送测序，并进行基因序列比对，结果显示，Satb2基因序列与Gen Bank报道的序列完全一致，见图3。2.4 慢病毒包装及滴度测定结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]牙周病基础治疗、正畸联合修复的综合治疗对牙周病患者切牙区牙龈乳头的美学重建效果[J]. 李岩峰.  全科口腔医学电子杂志. 2019(06)
[2]广泛型侵袭性牙周炎基础治疗前后牙槽骨变化的CBCT评价[J]. 孙晓娟,许春姣,池毓坦,李冬梅,王宏峰,王苗苗,张文瑞.  牙体牙髓牙周病学杂志. 2017(11)
[3]慢性牙周炎患者基础治疗前后龈沟液中瘦素水平变化的研究[J]. 段立荣,贾树芳,麻婷婷,王丽.  临床口腔医学杂志. 2016(05)



本文编号：3118883