含表皮生长因子受体（EGFR）启动子萤光素酶报告基因的三阴性乳腺癌细胞模型的建立

发布时间：2021-04-05 22:29

　　目的建立稳定表达人表皮生长因子受体（EGFR）启动子及萤光素酶（Luc）报告基因的三阴性乳腺癌细胞系,并对其应用进行初步验证。方法采用基因重组技术,构建含有EGFR启动子以及Luc报告基因的慢病毒载体,并感染MDA-MB231细胞,经过嘌呤霉素筛选获得能稳定表达Luc活性的MDA-MB231-EGFR-Luc2细胞系;分别采用EGFR激活剂EGF以及抑制剂吉非替尼处理细胞后检测Luc活性变化。结果通过基因测序和质粒双酶切鉴定, EGFR基因启动子Luc报告基因-慢病毒表达载体构建成功,经过嘌呤霉素筛选获得稳定表达Luc的MDA-MB231-EGFR-Luc2细胞; EGF可剂量依赖性的增加细胞中Luc的活性,而吉非替尼则相反。结论建立了MDA-MB231-EGFR-Luc2稳定表达EGFR启动子及Luc报告基因细胞系,为高通量筛选靶向EGFR的抗肿瘤药物提供一类新的细胞模型。 

【文章来源】：细胞与分子免疫学杂志. 2020,36(10)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

重组质粒EGFR-promoter-Luc2质粒双酶切电泳图

采用puro连续筛选1周后, 获得MDA-MB231-EGFR-Luc2细胞系, 荧光显微镜下可见细胞表达GFP, 转染率在90%以上(图2A)。Luc发光信号值测定结果表明, MDA-MB231-EGFR-Luc2细胞的Luc活性是MDA-MB231细胞的41.8倍(图2B), 表明人EGFR启动子Luc报告基因稳定转染细胞系建立成功。2.3 EGF处理增强MDA-MB231-EGFR-Luc2细胞Luc活性, 吉非替尼处理则相反

MDA-MB231-EGFR-Luc2细胞经EGF、 吉非替尼处理后, Luc活性检测发现, 随着EGF剂量的升高, 细胞Luc活性增加, 其中20 ng/mL的EGF可使Luc活性上升1.27倍; 而加入不同浓度吉非替尼则能明显降低细胞Luc的活性, 在80 μmol/L的吉非替尼作用下, 细胞Luc活性下降约20%(图3)。3 讨论

【参考文献】：
期刊论文
[1]Her-2阳性乳腺癌靶向治疗药物的研究进展[J]. 李阁,谷瑞雪,刘旭,钱诚.  肿瘤学杂志. 2020(01)
[2]人CTGF基因启动子荧光素酶报告基因的构建及活性鉴定[J]. 朱国念,钟礼春,吴思思,田鑫,汤小菊.  华西医学. 2020(01)
[3]基于双荧光素酶报告基因系统的人源SREBP1基因启动子的活性研究[J]. 杨念,李琛,李洪亮,郑燕,房树华,汪选斌,赵雅玮.  天津医药. 2019(09)
[4]慢病毒载体CV072介导的Mfn2过表达抑制肝星状细胞活化[J]. 朱含章,葛珂,刘凌,沈伟敏,贾长库.  中国病理生理杂志. 2019(06)
[5]基于雌激素受体调节Nrf2-ARE通路的黄芩中抗氧化成分的筛选[J]. 刘媛媛,刘陶,吴玉梅,张晗,赵鑫,刘志东,李楠.  中国药理学通报. 2019(06)
[6]p53基因3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miRNA-2127靶向关系的验证[J]. 张玉霞,袁小远,王友令,孟凯.  山东农业科学. 2019(01)
[7]雄激素受体激动剂与拮抗剂高通量筛选细胞模型的构建[J]. 王卓娅,傅强,刘彩云,梁高卫,吴培诚.  基因组学与应用生物学. 2015(03)
[8]腺相关病毒及慢病毒载体对骨髓间充质干细胞基因转染效率的比较[J]. 苏玉金,赵育梅,顾漪.  中国康复理论与实践. 2014(12)
[9]TNF-α 3’-UTR双荧光素酶报告基因系统的构建及丹参酮类药物筛选[J]. 韦忠红,朱智杰,刘玉萍,刘兆国,盛晓波,汪思亮,陶丽,祝娉婷,陈文星,王爱云,陆茵.  中国药理学通报. 2015(01)
[10]荧光素酶基因的研究进展[J]. 薛秀花,黄晨西.  生物学通报. 2013(09)



本文编号：3120221