疣孢漆斑菌胆红素氧化酶基因在拟南芥中的异源表达及酶学特性与功能的研究

发布时间：2021-04-08 19:59

　　胆红素氧化酶（Bilirubin oxidase）是一种含铜多酚氧化酶,能够将胆红素氧化为胆绿素和一些性质不是很清楚的其他物质。从微生物和植物中分离纯化出来的胆红素氧化酶,能氧化多种漆酶的多种底物,在环境保护领域显示出比漆酶更大的应用潜能。然而异源的胆红素氧化酶基因在植物中的异源表达却鲜有报道。本文通过对疣孢漆斑菌（Myrothecium verrucaria）的胆红素氧化酶基因进行改造后,成功实现了在拟南芥中的异源表达,并完成了对表达蛋白的酶学特性及对染料脱色能力的研究,并为以植物作为生物反应器生产重组胆红素氧化酶研究奠定了基础。具体研究内容和结果如下:1、按照植物偏爱密码、RNA稳定性原则、蛋白翻译N端原则等重新设计疣孢漆斑菌（Myrothecium verrucaria）的胆红素氧化酶基因,并对优化后的Mv BODI基因进行了人工合成。同时,在Mv BODI基因的5’端引入了蛋白分泌信号肽序列,便于实现在拟南芥中的分泌表达。将合成基因插入接到植物载体p CAMBIA1301,使该基因表达由强组成型启动子Ca MV35S控制。2、利用农杆菌蘸花法将Mv BODI基因导入拟南芥中,得... 

【文章来源】：上海海洋大学上海市

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

胆红素在生物体内的形成过程

ATTTA 等 PolyA 加尾信号和多个连续的 A+T 和 G+C 序列，使 G+C 的比例为40~60%，以防止内含子切割序列，减少两级结构 hairpins 在基因内部的出现，避免 2、3 位 TA 和 GC 双核苷酸的出现，因为 GC 在植物出现易造成甲基化。2.4.2 植物表达载体的构建将改造的 Mv BOD，CaMV35S 启动子，Nos 终止子进行酶切后，依次插入植物表达载体 pCAMBIA1301，，构建重组载体 pCAMBIA1301-BOD，每插入一个单元进行酶切鉴定和序列测定，获得 Mv BOD 基因植物分泌表达载体pCAMBIA1301-BOD。其结果如下：

上海海洋大学硕士学位论文182.4.3MvBODI序列分析用DNAMAN比对基因MvBOD和MvBODI，如图2-3所示，二者相似度很高为80.1%（如图2-3）。新合成的胆红素氧化酶基因（MvBODI）与MvBOD基因编码的氨基酸序列几乎完全相同，其相似度为98.96%（图2-4）。图2-2生物公司合成的MvBODI基因的DNA检测Fig.2-2DNADetectionofMvBODIgenesynthetizedbybiologicalcompany

【参考文献】：
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博士论文
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本文编号：3126171