斑马鱼卵黄蛋白原受体基因的鉴定、表达和功能分析
发布时间：2021-04-12 20:02
对于包括绝大多数鱼类、两栖爬行类和鸟类在内的卵生动物,卵黄发生是卵子发生过程中的关键阶段之一。在卵黄发生中,卵子将积累大量的卵黄蛋白（yolk proteins,YPs）,为早期胚胎体外发育提供能量和营养来源。YPs是卵黄蛋白原（vitellogenin,Vtg）通过卵黄蛋白原受体（vitellogenin receptor,VtgR）进入卵母细胞后积累的产物。YPs的前体Vtg通过何种VtgR进入卵母细胞一直是研究的热点。然而到目前为止,脊椎动物的VtgR还未完全确定,缺少直接的功能证据。在本研究中,我们以斑马鱼（Danio rerio）为动物模型,针对VtgR展开了系统性的鉴定和分析。（1）利用卵黄脂磷蛋白（lipovitellin,Lv）抗体,通过Western blotting和荧光免疫组化证实了在斑马鱼中卵黄发生过程依赖于Vtg的摄入。（2）已有证据表明VtgR基因属于低密度脂蛋白受体（low-density lipoprotein receptor,LDLR）家族,为鉴定何种VtgR介导Vtg的摄入,针对目前所有斑马鱼的LDLR家族成员基因,根据在卵巢中表达量的高低进行了筛...
【文章来源】：西北师范大学甘肃省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
硬骨鱼类卵黄发生过程图（参考AkihikoHara（2016），BJReading（2017），CraigVincentSullivan（2018）所画）
有许多优势[93]，其个体体型小，养殖成本较低。此外，其世代周期短，胚胎在2-3天就可以发育成幼鱼苗，孵出后的幼鱼苗经约3个月左右的时间就可达到繁殖条件，成年雌斑马鱼通常每周能产200-300个卵。而且其基因组序列和人类的相似度达到70%以上[94]。斑马鱼正式因为这些优势，很快成为生命科学研究诸多领域的模式生物之一[95,96]。斑马鱼是体外受精，受精后0-4天（dayspost-fertilization，dpf）称为胚胎期，5-15dpf称为幼苗期，16-90dpf称为幼鱼期，>90dpf称为成年期。斑马鱼的卵巢是异步卵巢，包含各个时期的卵泡。如图1-2所示，在斑马鱼卵母细胞发育过程中，根据形态标准和生理生化特性，将其分为以下几个阶段:早期生长期（primarygrowthstage，PG，<100μm）、卵黄生成前期（previtellogenic，PV，100-230μm）、卵黄生成早期（earlyvitellogenic，EV，230-330μm）、卵黄生成中期（midvitellogenic，MV，330-430μm）、完全生长期（fullygrown，FG，>650μm）和成熟期（maturation，M）期[97]。与其他的鱼类类似，斑马鱼的卵泡由内部的卵母细胞（oocyte）和外围的滤泡细胞（follicularcell）组成，滤泡细胞则由外侧的鞘膜细胞层和内测的颗粒细胞层组成。图1-2斑马鱼卵母细胞不同发育时期示意图PG：早期生长期；PV：卵黄生成前期；EV：卵黄生成早期；MV：卵黄生成中期；
文献综述15图1-3ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9、基于CRISPR/Cas9的单基因四位点敲除等靶向基因敲除技术说明及斑马鱼靶向基因敲除工作流程说明Fig1-3IllustrationoftargetedgeneknockouttechniquesincludingZFN,TALEN,CRISPR/Cas9,fourlocusknockoutofasinglegenebasedonCRISPR/Cas9andworkflowfortargetedgeneknockoutinzebrafish1.5研究目的YPs对胚胎及幼鱼早期的生长发育有着至关重要的作用，YPs的前体Vtg通过何种VtgR进入卵母细胞一直是研究的热点。在许多鱼类、两栖类和鸟类在内的脊椎动物以及在无脊椎动物中，已经有不少关于VtgR基因的分子特征和表达等方面的研究，但是针对VtgR基因的功能研究，只在无脊椎动物中有研究，而且脊椎动物VtgR还未完全确定，更缺少直接的功能证据。针对VtgR，本研究以斑马鱼为实验模型，系统性的鉴定和分析VtgR，斑马鱼中VtgR的确定将助于对鱼类卵黄发生分子机理的理解，更将推进鱼类卵子的体外培养和重建的研究。
【参考文献】：
期刊论文
[1]国家斑马鱼资源中心的资源、技术和服务建设[J]. 熊凤,谢训卫,潘鲁媛,李阔宇,柳力月,张昀,李玲璐,孙永华. 遗传. 2018(08)
[2]利用CRISPR/Cas9系统建立斑马鱼Spag6基因敲除模型[J]. 张世阳,张志兵,镇景开,Megan Hept,李为,James A.Lister,张玲,曾婧. 华中科技大学学报(医学版). 2018(02)
[3]中国斑马鱼研究发展历程及现状[J]. 贾顺姬,孟安明. 遗传. 2012(09)
本文编号：3133897
【文章来源】：西北师范大学甘肃省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
硬骨鱼类卵黄发生过程图（参考AkihikoHara（2016），BJReading（2017），CraigVincentSullivan（2018）所画）
有许多优势[93]，其个体体型小，养殖成本较低。此外，其世代周期短，胚胎在2-3天就可以发育成幼鱼苗，孵出后的幼鱼苗经约3个月左右的时间就可达到繁殖条件，成年雌斑马鱼通常每周能产200-300个卵。而且其基因组序列和人类的相似度达到70%以上[94]。斑马鱼正式因为这些优势，很快成为生命科学研究诸多领域的模式生物之一[95,96]。斑马鱼是体外受精，受精后0-4天（dayspost-fertilization，dpf）称为胚胎期，5-15dpf称为幼苗期，16-90dpf称为幼鱼期，>90dpf称为成年期。斑马鱼的卵巢是异步卵巢，包含各个时期的卵泡。如图1-2所示，在斑马鱼卵母细胞发育过程中，根据形态标准和生理生化特性，将其分为以下几个阶段:早期生长期（primarygrowthstage，PG，<100μm）、卵黄生成前期（previtellogenic，PV，100-230μm）、卵黄生成早期（earlyvitellogenic，EV，230-330μm）、卵黄生成中期（midvitellogenic，MV，330-430μm）、完全生长期（fullygrown，FG，>650μm）和成熟期（maturation，M）期[97]。与其他的鱼类类似，斑马鱼的卵泡由内部的卵母细胞（oocyte）和外围的滤泡细胞（follicularcell）组成，滤泡细胞则由外侧的鞘膜细胞层和内测的颗粒细胞层组成。图1-2斑马鱼卵母细胞不同发育时期示意图PG：早期生长期；PV：卵黄生成前期；EV：卵黄生成早期；MV：卵黄生成中期；
文献综述15图1-3ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9、基于CRISPR/Cas9的单基因四位点敲除等靶向基因敲除技术说明及斑马鱼靶向基因敲除工作流程说明Fig1-3IllustrationoftargetedgeneknockouttechniquesincludingZFN,TALEN,CRISPR/Cas9,fourlocusknockoutofasinglegenebasedonCRISPR/Cas9andworkflowfortargetedgeneknockoutinzebrafish1.5研究目的YPs对胚胎及幼鱼早期的生长发育有着至关重要的作用，YPs的前体Vtg通过何种VtgR进入卵母细胞一直是研究的热点。在许多鱼类、两栖类和鸟类在内的脊椎动物以及在无脊椎动物中，已经有不少关于VtgR基因的分子特征和表达等方面的研究，但是针对VtgR基因的功能研究，只在无脊椎动物中有研究，而且脊椎动物VtgR还未完全确定，更缺少直接的功能证据。针对VtgR，本研究以斑马鱼为实验模型，系统性的鉴定和分析VtgR，斑马鱼中VtgR的确定将助于对鱼类卵黄发生分子机理的理解，更将推进鱼类卵子的体外培养和重建的研究。
【参考文献】：
期刊论文
[1]国家斑马鱼资源中心的资源、技术和服务建设[J]. 熊凤,谢训卫,潘鲁媛,李阔宇,柳力月,张昀,李玲璐,孙永华. 遗传. 2018(08)
[2]利用CRISPR/Cas9系统建立斑马鱼Spag6基因敲除模型[J]. 张世阳,张志兵,镇景开,Megan Hept,李为,James A.Lister,张玲,曾婧. 华中科技大学学报(医学版). 2018(02)
[3]中国斑马鱼研究发展历程及现状[J]. 贾顺姬,孟安明. 遗传. 2012(09)
本文编号：3133897
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3133897.html
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