参与调控牛病毒性腹泻病毒感染宿主细胞关键microRNA的筛选与靶基因鉴定

发布时间：2021-04-14 10:30

　　牛病毒性腹泻病毒（BVDV）是一种有囊膜的单链RNA病毒,属于瘟病毒属黄病毒科。BVDV在牛中引起许多疾病,包括腹泻,粘膜病,持续感染,出血综合征以及生殖和呼吸疾病,导致养牛业的巨大经济损失。对于该病目前尚无有效的治疗方法,因此加强对本病的研究就显得尤为重要。MicroRNAs（miRNAs）是一类小的非编码RNA,其与多个靶mRNA的3’非编码区（UTR）中的互补序列结合;尽管miRNA的序列短小,但其在信号转导途径中起重要作用。现有越来越多的研究结果均表明miRNA与病毒感染密切相关,从miRNA方向研究BVDV调控宿主的机制可为BVDV的防控提供理论依据。本试验以MDBK和家兔为宿主,通过设计炎症反应关键酶COX-2和炎症因子如IL-8、MIP-3α、GRO-α的特异性引物,分别从MDBK、家兔脾脏组织和小肠上皮组织中分别扩增目的片段,建立实时荧光相对定量PCR方法检测感染前后COX-2和IL-8、MIP-3α、GRO-αmRNA的相对表达变化。结果表明在BVDV感染MDBK细胞后,COX-2和IL-8、GRO-αmRNA表达量均显著高于未感染前（P<0.01）;当BVDV... 

【文章来源】：河北农业大学河北省

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

miRNA形成示意图

3 结果DV NADL 感染 MDBK 细胞的形态学观察MDBK 细胞复苏之后正常培养，设对照组和 BVDV 感染组。观察细胞形态结果如K 细胞培养过程中，用倒置显微镜观察细胞长势，发现细胞形态并不改变，且营养无细胞脱落与病变，见图 4A；而 BVDV NADL 感染 MDBK 细胞后，细胞前 2h2h 之后细胞形态逐渐发生变化，细胞开始变圆变形，在感染 16h 细胞之间形成空泡辨认，并伴有细胞脱落和裂解，见图 2B。

0M 1 2 3 4 5家兔前后炎症因子的表达变化测定结鉴定结果录和 PCR 扩增，见图 3，与预期条带相符。条带大小-8 为 212bp，MIP-3α 为 172bp，GRO-α 为 163bp。经测序 GAPDH 大小为 248bp，COX-2 为 208bp，IL与预期结果一致。通过 BLAST 发现测序所得序列与见图 4 ，证明扩增和回收的片段是目的基因片段


本文编号：3137158