基于CRISPR/Cas9技术的和1基因敲除MDCK细胞系的构建及初步鉴定

发布时间：2021-04-15 23:27

　　目的 构建线粒体抗病毒信号（mitochondrial antiviral signaling,MAVS）和核因子κB1（nuclear factorkappa B1,NFκB1）基因敲除的犬肾细胞系（Madin-Daby canine kidney cells, MDCK）,对细胞系的生长特性、流感病毒（influenza virus, Flu）的增殖特性进行初步鉴定。方法 采用CRISPR/Cas9技术,将MDCK细胞的MAVS和NFκB1基因敲除,获得稳定的敲除细胞系。接种Flu并检测培养上清中病毒的血凝（hemagglutinination, HA）滴度和TCID50滴度,与野生MDCK细胞进行比较。结果 获得2株稳定敲除的MDCK细胞系MDCK-MAVS－和MDCK-NFκB1－,与野生MDCK细胞同样为贴壁的上皮样细胞。接种Flu后,2株敲除细胞系测定的病毒HA滴度与野生细胞相比无明显差异,TCID50分别比野生MDCK细胞系提高了9.5倍和10倍,其差异有统计学意义（P＝0.0316）。结论 本研究构建的2株基因敲除细胞系MDCK-MAVS－和MDCK-NFκB1－能够提... 

【文章来源】：中华实验和临床病毒学杂志. 2020,(02)

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本文编号：3140292