利用基因编辑技术构建表达鼠源白介素15的溶瘤病毒

发布时间：2021-04-21 05:46

　　溶瘤病毒（Oncolytic viruses）是一种重要的癌症免疫治疗策略。经过基因编辑技术改造后的二型单纯疱疹病毒（herpes simplex virus type II,HSVⅡ）能够选择性的在肿瘤细胞中复制和增殖,直接杀死肿瘤细胞。伴随溶瘤病毒的增殖:a)肿瘤微环境对抗肿瘤的免疫机制得以部分解除;b)肿瘤细胞在裂解时释放特异性的肿瘤抗原激活肿瘤微环境中特异性的抗肿瘤免疫反应;c)溶瘤病毒在肿瘤微环境中表达增强抗肿瘤免疫反应的细胞因子等。白介素15（Interleukin-15,IL-15）是14至15kDa的细胞因子。IL-15可通过抗体依赖性介导的细胞毒性（antibody dependent cell mediated cytotoxicity,ADCC）效应增强自然杀伤细胞（NK）和巨噬细胞的抗肿瘤作用。IL-15与特异性靶向肿瘤细胞的抗体联合治疗时,IL-15能够上调NK细胞和巨噬细胞上Fc受体表达,抗体与肿瘤的抗原结合后,抗体的Fc片段与Fc受体结合时促进NK细胞和巨噬细胞杀伤肿瘤细胞。CRISPR/Cas9（clustered regular interspaced... 

【文章来源】：湖北工业大学湖北省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第1章 引言
    1.1 恶性肿瘤的研究和治疗现状
    1.2 溶瘤病毒免疫治疗历史
    1.3 溶瘤病毒疗法的机遇和挑战
    1.4 基因编辑技术
    1.5 白介素15
    1.6 目的和意义
第2章 材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验试剂
        2.1.2 实验仪器与设备
        2.1.3 溶液配方
        2.1.4 细胞系及病毒株
        2.1.5 小鼠
    2.2 实验方法
        2.2.1 质粒构建
        2.2.2 oHSV2 的生产
        2.2.3 肿瘤细胞复苏
        2.2.4 肿瘤细胞培养
        2.2.5 病毒构建
        2.2.6 病毒基因PCR分析
        2.2.7 IL-15ELISA分析
        2.2.8 病毒体外杀伤肿瘤细胞
        2.2.9 qPCR分析病毒感染肿瘤细胞后PD-L1 的表达
        2.2.10 CT26 肿瘤模型建立
        2.2.11 统计方法
第3章 实验结果
    3.1 CRISPR/CAS9 构建OHSV2-MIL-15CFP时出现了非同源重组修复（NHEJ）
    3.2 鉴定OHSV2-MIL-15CFP
    3.3 在人源的肿瘤细胞中OHSV2-MIL-15CFP具有更强的复制能力
    3.4 OHSV2-MIL-15CFP和OHSV2-HGM-CSF在体外感染肿瘤细胞后都能在MRNA水平上调肿瘤细胞的PD-L1 表达
    3.5 在CT26 小鼠模型上,OHSV2-MIL-15CFP能够抑制肿瘤的生长并且延长小鼠的生存期
第4章 讨论与展望
参考文献
致谢



本文编号：3151177