Nedd4L基因调控大鼠肝星状细胞TGF-β1/Smad信号通路的实验研究

发布时间：2021-04-21 19:52

　　目的:探索Nedd4L基因对大鼠肝星状细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响及意义。方法:1.质粒最佳作用浓度将不同浓度（50nmol/L、30nmol/L、10nmol/L、0nmol/L）带荧光的阴性质粒pEGFP-N1或FAM-Negative siRNA借由脂质体转染试剂LipofectamineTM 2000转染入HSC-T6 24小时后,在倒置荧光显微镜下观察各浓度组的转染率即为带绿色荧光细胞占总细胞的比例,明确质粒最佳转染浓度。2.TGF-β1对HSC-T6中Nedd4L表达的影响首先用不同浓度TGF-β1（0 ng/ml、1 ng/ml、2.5 ng/ml、5 ng/ml）刺激HSC-T624小时后,用RT-PCR方法检测Collagen-ⅠmRNA及Nedd4L mRNA的表达,以建立最佳体外肝纤维化模型;随后选取最佳浓度TGF-β1刺激HSC-T6 0小时、12小时、24小时、48小时后,同样用RT-PCR方法检测Collagen-ⅠmRNA及Nedd4L mRNA的表达,以明确TGF-β1对HSC-T6中Nedd4L表达的影响。3.Nedd4L基因过表达对HSC... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
前言
材料与方法
    1 材料
        1.1 细胞来源
        1.2 细胞培养材料
        1.3 主要试剂
        1.4 主要仪器设备
        1.5 主要溶液及配制
    2 方法
        2.1 大鼠肝星状细胞的复苏与培养
        2.2 实验分组
        2.3 脂质体转染
        2.4 REAL-TIME PCR检测NEDD4L、SMAD3、P-SMAD3、COLLAGEN-Ⅰ各MRNA的含量
        2.5 WESTERN BLOT检测NEDD4L、SMAD3、P-SMAD3、COLLAGEN-Ⅰ蛋白的表达
    3 统计分析
结果
讨论
存在问题和需要进一步研究的问题
参考文献
附录
综述
    参考文献
致谢
在学期间承担/参与的科研课题与研究成果
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]新疆哈萨克族人神经前体细胞表达发育调控样蛋白4基因rs3865418多态性与中心性肥胖的相关性[J]. 王红梅,洪静,罗文利,常建航,姚晓光,李南方.  中国医学科学院学报. 2011(05)
[2]神经前体细胞表达发育调控样蛋白4基因多态性与哈萨克族高血压病的关联研究[J]. 王红梅,李南方,洪静,姚晓光,罗文利,常建航.  中华心血管病杂志. 2010 (10)
[3]神经前体细胞表达发育调控样基因rs4149601多态性与新疆哈萨克族人群中心性肥胖的关联研究[J]. 王红梅,李南方,姚晓光,洪静,罗文利,常建航.  中华医学遗传学杂志. 2010 (06)



本文编号：3152384