斑痣悬茧蜂化学感受基因鉴定、组织表达谱及体外表达的研究

发布时间：2021-04-24 22:30

　　斑痣悬茧蜂Meteorus pulchricornis属膜翅目茧蜂科,是斜纹夜蛾Spodoptera litura、甜菜夜蛾Spodoptera exigua等鳞翅目害虫的重要优势寄生性天敌,寄主范围广,是控制鳞翅目害虫数量的重要自然因子。近年来,随着各种测序技术、分子生物学及生物信息学技术的迅猛发展,一大批昆虫的化学感受基因被鉴定出来,极大的丰富了我们对昆虫化学感受机制的认识,但已报道的案例多集中在鳞翅目、鞘翅目等昆虫中,对膜翅目寄生性昆虫的化学感受研究仍较为缺乏。寄生蜂的化学感受系统在其取食、交配和产卵等行为中具有举足轻重的作用。寄生蜂在复杂的化学环境中成功定位寄主是其成功寄生害虫、胁迫害虫种群动态及自身繁衍的基础条件,对寄生蜂化学感受机制的研究有助于我们深入了解寄生蜂搜寻行为生态学机制,理清寄生效率与化学信号介导的寄生蜂寄主识别间的关系,也对更好的利用寄生蜂开展害虫生防实践具有重要的参考价值。本论文研究内容包括:（1）通过二代转录组测序,从斑痣悬茧蜂触角中获得一系列的化学感受基因,对气味结合蛋白（OBPs）,化学感受蛋白（CSPs）,感觉神经元膜蛋白（SNMPs）,气味受体（OR... 

【文章来源】：江苏科技大学江苏省

【文章页数】：131 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 昆虫触角感器和化学感受机制
    1.2 产卵器的化学感受基因功能研究进展
    1.3 昆虫化学感受基因的研究进展
        1.3.1 气味结合蛋白（Odorant binding proteins,OBPs）的研究进展
        1.3.2 化学感受系统中其他主要的化学感受基因
    1.4 气味降解酶（ODEs）
        1.4.1 羧酸酯酶（Carboxylesterases, CXEs）
        1.4.2 谷胱甘肽S转移酶（Glutathione S transferases,GSTs）
    1.5 研究对象
    1.6 研究目的和主要内容
        1.6.1 研究目的和意义
        1.6.2 研究内容和技术路线
第2章 斑痣悬茧蜂触角化学感受基因及气味降解酶基因的鉴定、序列分析及表达谱
    2.1 斑痣悬茧蜂触角化学感受基因的鉴定和同源性分析
        2.1.1 供试材料
        2.1.2 主要试剂和设备
        2.1.3 总RNA的提取
        2.1.4 触角cDNA文库的构建和Illumina测序
        2.1.5 触角序列的组装和功能注释
        2.1.6 斑痣悬茧蜂化学感受基因及气味降解酶基因的鉴定
        2.1.7 触角化学感受基因及气味降解酶基因的序列比对和系统进化树分析
        2.1.8 触角MpulOBPs,MpulGRs,MpulCXEs和MpulGSTs的组织表达谱分析
        2.1.9 数据分析
    2.2 结果
        2.2.1 Illumina测序和转录组组装
        2.2.2 触角unigenes的GO和KOG分类
        2.2.3 触角气味结合蛋白（OBPs）基因的鉴定、序列特征及进化树分析
        2.2.4 触角化学感受蛋白（CSPs）基因的鉴定、序列特征及进化树分析
        2.2.5 触角化学感受受体的鉴定、序列特征及进化树分析
        2.2.6 触角感受神经元膜蛋白（SNMPs）基因的鉴定、序列特征及进化树分析
        2.2.7 触角羧酸酯酶（CXEs）基因的鉴定、序列特征及进化树分析
        2.2.8 触角谷胱甘肽S转移酶（GSTs）的鉴定、序列特征及进化树分析
        2.2.9 触角MpulOBPs相对表达量分析
        2.2.10 触角MpulGRs组织表达谱分析
        2.2.11 触角MpulCXEs和MpulGSTs的组织表达谱分析
    2.3 讨论
    2.4 本章小结
第3章 斑痣悬茧蜂产卵器感器观测和化学感受基因的鉴定
    3.1 材料和方法
        3.1.1 供试材料
        3.1.2 主要试剂和设备
    3.2 斑痣悬茧蜂产卵器形态和感器结构的观察
    3.3 斑痣悬茧蜂产卵器化学感受基因的鉴定和序列分析
        3.3.1 组织总RNA提取
        3.3.2 产卵器cDNA文库的构建和Illumina测序
        3.3.3 产卵器序列组装和功能注释
        3.3.4 产卵器化学感受基因的鉴定
        3.3.5 产卵器化学感受基因的同源性比对和系统进化分析
        3.3.6 产卵器气味结合蛋白（OBPs）基因的组织表达谱分析
    3.4 结果
        3.4.1 产卵器的基本结构
        3.4.2 产卵器Illumina测序和unigenes序列组装
        3.4.3 产卵器unigenes功能注释
        3.4.4 产卵器气味结合蛋白（OBPs）基因的鉴定、序列特征及进化树分析
        3.4.5 产卵器化学感受蛋白（CSPs）基因的鉴定、序列特征及进化树分析
        3.4.6 产卵器气味受体（ORs）基因的鉴定、序列特征及进化树分析
        3.4.7 产卵器离子受体（IRs）基因的鉴定、序列特征及进化树分析
        3.4.8 产卵器味觉受体（GRs）基因的鉴定、序列特征及进化树分析
        3.4.9 产卵器感觉神经元膜蛋白（SNMPs）基因的鉴定、序列特征及进化树分析
        3.4.10 产卵器气味结合蛋白（OBPs）基因的组织表达谱分析
    3.5 讨论
    3.6 本章小结
第4章 MpulOBP9的原核表达及蛋白纯化
    4.1 主要试剂和设备
    4.2 MpulOBP9的体外表达和蛋白纯化
        4.2.1 组织RNA提取和cDNA第一条链合成
        4.2.2 引物设计和PCR扩增
        4.2.3 重组表达载体的构建
        4.2.4 重组质粒的转化和表达
        4.2.5 重组蛋白的纯化和肠激酶酶切
    4.3 结果
        4.3.1 重组质粒的鉴定
        4.3.2 目的蛋白的诱导表达和可溶性分析
    4.4 讨论
    4.5 本章小结
结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]混腔室茧蜂触角微观结构的扫描电子显微镜观察[J]. 盛晟,郑煜,周雨,廖成武,吴福安.  蚕业科学. 2016(06)
[2]钝叶榕三种进果榕小蜂雌性触角的结构、感器及其适生意义[J]. 李宗波,杨培,杨大荣.  环境昆虫学报. 2013(02)
[3]应用周氏啮小蜂防治美国白蛾的试验[J]. 付振科,李伟.  防护林科技. 2010(01)
[4]斜纹夜蛾侧沟茧蜂对寄主龄期的选择[J]. 王奎武,蒋杰贤,游兰韶,陈永年,蒋祝瑞.  湖南农业大学学报(自然科学版). 2001(05)

博士论文
[1]斑痣悬茧蜂Meteorus pulchricornis寄主选择与发育策略的研究[D]. 刘亚慧.南京农业大学 2007



本文编号：3158177