大豆GmGolS基因的原核表达及抗旱性分析

发布时间：2021-04-27 19:43

　　肌醇半乳糖苷合成酶（galactinol synthase,简称GolS）是棉子糖系列寡糖（raffinose family oligosaccharides,简称RFOs）生物合成途径中的关键酶,在植物应对非生物胁迫的过程中发挥着重要作用。通过逆转录（RT）-PCR从大豆叶片cDNA中扩增得到编码肌醇半乳糖苷合成酶的基因GmGolS,再将GmGolS基因构建到原核表达载体pET28上,然后将载体导入大肠杆菌Rosetta（DE3）中,对其进行异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalacto pyranoside,简称IPTG）诱导。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,简称SDS-PAGE）结果表明,在诱导时间为3 h、IPTG浓度为0.1 mmol/L的条件下,可以获得大量重组蛋白,分子量约为40 ku。对表达GmGolS蛋白的大肠杆菌进行抗旱性分析的结果显示,GmGolS基因在大肠杆菌中的过表达降低了重组菌的生活力,使其对干旱胁迫更加敏... 

【文章来源】：江苏农业科学. 2020,48(14)

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与试剂
    1.2 试验方法
        1.2.1 大豆叶片总RNA的提取及cDNA反转录
        1.2.2 目的基因的扩增
        1.2.3 原核表达载体的构建
        1.2.4 重组蛋白的诱导表达
        1.2.5 表达GmGolS蛋白的大肠杆菌干旱胁迫分析
2 结果与分析
    2.1 GmGolS基因的克隆
    2.2 GmGolS基因原核表达载体的构建
    2.3 重组蛋白的诱导表达
    2.4 表达GmGolS蛋白的大肠杆菌干旱胁迫分析
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]橡胶树炭疽菌CsPbs2基因的原核表达分析[J]. 廖小淼,何其光,刘耀,徐良向,龙熙平,刘文波,张宇,林春花,缪卫国.  分子植物育种. 2019(07)
[2]稻瘟病菌Dam1基因的克隆、原核表达及纯化[J]. 许雨晨,吕哲,陈保善,彭好文.  基因组学与应用生物学. 2016(09)
[3]盐芥TsGPX3基因的克隆、亚细胞定位与原核表达[J]. 王宁,陈静,高飞,李华云,隋欣,周宜君.  生物技术通报. 2016(04)
[4]木薯中肌醇半乳糖苷合成酶基因在大肠杆菌中的表达[J]. 范洁,王雨晴,李瑞梅,张帆,段瑞军,符少萍,刘姣,胡新文,郭建春.  分子植物育种. 2015(05)
[5]高粱SbGABA-Ts基因的克隆、原核表达及纯化[J]. 杨泽伟,王龙海,朱莉,汪海,黄大昉,郎志宏.  生物技术通报. 2015(05)
[6]GA2ox1氧化酶基因的克隆及原核表达[J]. 常丽,赵小英,郭明,林建中,李秀山,刘选明.  西北植物学报. 2010(06)

硕士论文
[1]盐藻DsRab基因的载体构建、原核表达及亚细胞定位分析[D]. 李秀娟.大连海洋大学 2014
[2]沙冬青耐寒基因AmGolS的克隆和遗传转化研究[D]. 宋健.山东农业大学 2007



本文编号：3164052