一种增强基因表达的自激活GAL4/UAS系统表达盒的建立

发布时间：2021-04-30 11:21

　　基因导入系统较低的转染效率限制了基因转移技术的治疗效用,尽管病毒介导的载体系统可以具备相对较高的基因表达水平,但它在基因治疗中插入或整合到染色体的位置是随机的,有引起插入突变及细胞恶性转化的潜在危险;非病毒载体系统的免疫原性较低,安全可靠,并适于大规模生产,在外源基因短暂表达中具有优势,并广泛应用于各种DNA疫苗的研制,它的不足是体内转导效率低,靶向性差,基因表达时间短。综上,采用生物安全性较好的非病毒方式,如何增强外源基因表达,进而延长基因治疗的时间,受到人们越来越多的关注。另一方面,重组蛋白表达技术是研究蛋白质结构、功能,及筛选靶向药物的有力工具,在基础科学以及医药学领域发挥了重要作用。截至目前,人们已经研究开发出多种原核和真核表达系统用以生产重组蛋白。原核表达系统方便,便宜、周期短,但有些蛋白折叠不好,不带有糖基化等修饰;而哺乳动物表达系统——作为典型的真核表达系统,主要用于制备分泌的重组蛋白。相较于其他表达系统的宿主,它具有最出色的蛋白质折叠和二硫键形成能力,表达出的蛋白最接近天然蛋白,有利于蛋白结构和功能研究,但也存在着产量低,培养成本较高的劣势。因此,人们期望发明一种简单高... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 基因治疗研究概述
        1.1.1 基因治疗
        1.1.2 载体导入系统
    1.2 重组蛋白的生产概述
        1.2.1 重组蛋白的生产
        1.2.2 哺乳动物细胞表达系统
    1.3 酵母免疫反应概述
        1.3.1 重组酿酒酵母
        1.3.2 重组酵母介导的免疫反应
    1.4 GAL4/UAS系统概述
        1.4.1 Gal4蛋白
        1.4.2 Gal4蛋白的结合序列
    1.5 GAL4/UAS系统表达盒
    1.6 研究目的与意义
第二章 GAL4/UAS系统表达盒的构建
    2.1 实验设计
    2.2 材料方法
        2.2.1 主要材料
        2.2.2 Gal4/UAS系统表达盒的构建
        2.2.3 Gal4/UAS系统表达盒增强效果检测
    2.3 结果与分析
        2.3.1 Gal4/UAS系统表达盒的构建
        2.3.2 HEK293T细胞转染和荧光观察
        2.3.3 Gal4/UAS系统表达盒增强效果检测
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 GAL4/UAS系统表达盒的优化及稳定性检测
    3.1 实验设计
    3.2 材料方法
        3.2.1 主要材料
        3.2.2 比较和优化Gal4/UAS系统表达盒
        3.2.3 增强基因表达效果的比较
        3.2.4 增强基因表达稳定性的检测
    3.3 结果与分析
        3.3.1 比较和优化Gal4/UAS系统表达盒的载体构建
        3.3.2 Gal4/UAS系统表达盒工作有效性的载体构建
        3.3.3 不同表达盒增强效果比较和工作有效性探究
        3.3.4 Gal4/UAS系统表达盒稳定性检测
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 GAL4/UAS系统表达盒在CHO细胞上的验证
    4.1 研究思路
    4.2 材料方法
        4.2.1 主要材料
        4.2.2 CHO细胞上检测Luciferase基因的表达
    4.3 结果与分析
        4.3.1 CHO细胞转染条件的摸索
        4.3.2 CHO细胞上检测Luciferase基因的表达量
    4.4 讨论
        4.4.1 CHO细胞转染
        4.4.2 CHO细胞上检测Luciferase基因表达量
    4.5 小结
结论和创新点
参考文献
附录
缩略词
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]CHO细胞表达系统研究进展[J]. 郑惠惠,江洪.  生物技术进展. 2016(04)
[2]重组蛋白表达系统的研究进展[J]. 范翠英,冯利兴,樊金玲,果德安,刘璇.  生物技术. 2012(02)
[3]Advancement and prospects of tumor gene therapy[J]. Chao Zhang1, Qing-Tao Wang1, He Liu1, Zhen-Zhu Zhang1, and Wen-Lin Huang1,2,3 CAS Key Laboratory of Pathogenic Microbiology 1 and Immunology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, P. R. China; State Key Laboratory of Oncology 2 in South China, Guangzhou, Guangdong 510060, P. R. China; Research 3 Department, Sun Yat-sen University Cancer Center, Guangzhou, Guangdong 510060, P. R. China..  癌症. 2011(03)
[4]谷胱甘肽生产菌重组巴斯德毕赤氏酵母的构建[J]. 王盛,金大勇,蔡宇杰.  食品与机械. 2007(06)
[5]真核表达系统的研究进展[J]. 高云.  中华男科学. 2002(04)
[6]重组酵母乙肝疫苗免疫效果研究[J]. 靳维声,邢玉兰,陈铁珊,张淑先,张晓红.  中华微生物学和免疫学杂志. 1998(04)

博士论文
[1]胞内细菌性感染激活模式识别受体信号介导的宿主免疫应答机制[D]. 阳大海.华东理工大学 2015
[2]重组酵母调控肠道免疫细胞（CD11c+DCs）功能的机理和应用研究[D]. 张婷婷.西北农林科技大学 2013

硕士论文
[1]RNA模板介导同源重组修复的探讨及不同CRISPR/Cas9系统的比较研究[D]. 韩芙蓉.西北农林科技大学 2016
[2]重组人红细胞生成素二聚体融合蛋白的构建、表达和纯化工艺研究[D]. 有红霞.吉林大学 2008



本文编号：3169433