黏虫几丁质脱乙酰基酶MsCDA1基因的克隆及功能研究

发布时间：2021-05-08 00:37

　　黏虫（Mythimna separata（Walker））属于鳞翅目夜蛾科昆虫,它是我国重要的农业害虫之一。目前对于黏虫的防治主要依靠化学农药的方法,但不合理的化学防治不仅会对环境造成污染,使黏虫产生抗药性,而且会对非靶标生物造成伤害。对于解决该难题来说,利用基因工程的手段进行生物防治是目前最为环保有效的措施之一。围食膜是黏虫抵御外界侵害的重要的天然屏障,其主要成份是几丁质、蛋白质和多糖,它具有保护中肠上皮细胞不受机械损伤,以及抵御病毒、细菌及其他有害物质入侵的作用。几丁质脱乙酰基酶（CDAs）是黏虫体内促进几丁质降解为壳聚糖的一类水解酶,当CDAs基因在虫体中不表达时,就会抑制壳聚糖的合成从而改变围食膜的结构使黏虫不能正常生长发育。通过对几丁质脱乙酰基酶功能的研究,不仅使得几丁质降解过程更加明确,也为研究利用生物技术方法防治害虫提供了重要的理论依据。基于此,本研究通过高通量测序的方法在黏虫体内获得MsCDA1基因,通过生物信息学分析、荧光定量PCR检测、MsCDA1基因的表达模式分析、RNA干扰、扫描电镜检测等试验,以从分子水平上揭示几丁质脱乙酰基酶的基因功能、深入探索其在黏虫几丁质... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 黏虫简介
    1.2 昆虫几丁质的研究
        1.2.1 昆虫几丁质的发现
        1.2.2 昆虫几丁质结构
    1.3 CDA的发现及在昆虫中的作用
        1.3.1 CDA的发现与应用
        1.3.2 昆虫CDA的种类
        1.3.3 CDA参与昆虫的几丁质降解
        1.3.4 昆虫CDA的克隆及表达活性检测
        1.3.5 CDA对昆虫围食膜的影响
    1.4 CDA对昆虫蜕皮的影响
    1.5 研究目的与意义
    1.6 技术路线
2 材料和方法
    2.1 试验材料及仪器
        2.1.1 试剂选择
        2.1.2 昆虫饲养
        2.1.3 仪器设备
    2.2 试验方法
        2.2.1 黏虫RNA的提取
        2.2.2 第一条链cDNA的合成
        2.2.3 MsCDA1特性的研究
        2.2.4 荧光定量PCR
        2.2.5 MsCDA1基因的RNAi沉默的研究
        2.2.6 扫描电镜操作方法
3 结果与分析
    3.1 MsCDA1基因生物信息学分析
    3.2 预测MsCDA1蛋白质二级结构和三级结构
    3.3 预测MsCDA1蛋白质跨膜区域
    3.4 系统进化分析
    3.5 MsCDA1与其它物种的同源性比对
    3.6 黏虫几丁质脱乙酰基酶特性的研究
        3.6.1 MsCDA1基因在不同发育阶段的表达模式分析
        3.6.2 MsCDA1基因在不同组织中的表达模式分析
        3.6.3 RNAi处理的黏虫MsCDA1表达模式分析
    3.7 扫描电镜观察围食膜结构
4 讨论
    4.1 MsCDA1基因的克隆与序列分析
    4.2 MsCDA1生物学特性的分析
    4.3 MsCDA1基因RNA干扰的研究
    4.4 MsCDA1基因沉默后对围食膜的影响
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]小地老虎几丁质脱乙酰基酶基因的克隆与原核表达[J]. 樊东,郭博智,高艳玲,赵奎军,王晓云.  东北农业大学学报. 2013(04)
[2]杀虫单与有机磷杀虫剂混配对粘虫的增效作用研究[J]. 裴晖,欧晓明,王永江,喻快,林雪梅.  新农药. 2006(01)
[3]昆虫病毒增效剂研究进展[J]. 郭慧芳,方继朝,韩召军.  昆虫学报. 2003(06)
[4]昆虫几丁质酶作为生防措施促进因子的应用前景[J]. 彭宇,王荫长.  世界农药. 2002(01)
[5]低温和几丁质酶处理对棉铃虫围食膜的影响[J]. 张严峻,谭军,林玉清.  中国生物防治. 2000(04)
[6]广东剃枝虫种类及其发生情况的调查[J]. 吴荣宗.  植物保护学报. 1963(03)

硕士论文
[1]小麦条锈菌细胞壁相关基因的寄主诱导转基因沉默研究[D]. 刘强.山东农业大学 2015



本文编号：3174334