小鼠Oct4基因剪接体的鉴定和功能分析

发布时间：2021-05-08 06:12

　　小鼠干细胞作为重要生物材料在胚胎发育和临床治疗等研究方面具有重大理论和运用价值。Oct4作为核心转录因子,对干细胞的自我更新和多能性维持具有重要调控作用。Oct4转录因子控制早期胚胎的发育和分化,在多种干细胞中高表达,包括生殖细胞、胚胎干细胞（ESCs）、胚胎生殖细胞（EGCs）和胚胎肿瘤细胞（ECCs）。在小鼠中,Oct4在细胞多能性调节网络中起核心作用。通过异位表达转录因子Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc,可以将体细胞重编程为诱导多能干细胞（i PSCs）。人OCT4基因可以选择性剪接成OCT4A、OCT4B和OCT4B1。但是,关于Oct4剪接体的功能研究迄今尚不充分。本研究以小鼠多能干细胞为研究对象,通过不同方法对Oct4基因剪接体的表达进行鉴定,并对Oct4b基因剪接体的功能进行分析研究。具体结果如下:1.小鼠Oct4基因的生物信息学分析利用生物信息学方法对Oct4基因检索、比对和分析发现,小鼠Oct4基因的不同剪接体定位于17号染色体上,并且Oct4a和Oct4b具有相同的2-5外显子。Oct4a和Oct4b的剪切主要发生在外显子1和内含子1区域,导致它们具有不同的... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：104 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
文献综述
    第一章 Oct4基因的研究
        1.1 OCT4基因及其表达
            1.1.1 Oct4基因
            1.1.2 Oct4在早期胚胎和多能干细胞中的表达
            1.1.3 Oct4在其他细胞中的表达
        1.2 OCT4基因的表达调控
            1.2.1 Oct4表达的调控元件
            1.2.2 小鼠Oct4表达的调控网络
            1.2.3 转录后Oct4的表达调控
        1.3 OCT4基因的功能
            1.3.1 Oct4在多能性维持中的作用
            1.3.2 Oct4在细胞重编程中的作用
            1.3.3 Oct4在肿瘤中的作用
    第二章 剪接体的研究
        2.1 RNA的选择性剪接
            2.1.1 剪接体的概述
            2.1.2 剪接体的调控
            2.1.3 干细胞中的选择性剪接
        2.2 OCT4的选择性剪接
            2.2.1 OCT4剪接体的研究
            2.2.2 OCT4假基因的研究
试验研究
    前言
    第三章 小鼠Oct4基因的生物信息学分析
        3.1 材料和方法
            3.1.1 试验材料
            3.1.2 试验方法
        3.2 结果
            3.2.1 小鼠Oct4基因的定位和启动子分析
            3.2.2 小鼠Oct4基因的保守性分析
            3.2.3 小鼠Oct4基因在不同组织和细胞中的表达
            3.2.4 小鼠Oct4基因不同剪接体的基因组序列
        3.3 讨论
        3.4 小结
    第四章 小鼠Oct4基因剪接体的鉴定
        4.1 材料和方法
            4.1.1 试验材料
            4.1.2 试验方法
        4.2 结果
            4.2.1 小鼠Oct4基因剪接体的表达鉴定
            4.2.2 小鼠Oct4基因剪接体在不同细胞中的表达
            4.2.3 小鼠Oct4的蛋白表达检测
            4.2.4 P19细胞中Oct4蛋白的差异表达
            4.2.5 不同Oct4蛋白抗体的检测分析
        4.3 讨论
        4.4 小结
    第五章 小鼠Oct4b的蛋白表达和定位
        5.1 材料和方法
            5.1.1 试验材料
            5.1.2 试验方法
        5.2 结果
            5.2.1 小鼠剪接体Oct4b表达载体的构建
            5.2.2 小鼠剪接体Oct4b的选择性剪切
            5.2.3 小鼠剪接体Oct4b的蛋白表达
            5.2.4 小鼠剪接体Oct4b的蛋白定位
        5.3 讨论
        5.4 小结
    第六章 小鼠Oct4基因剪接体的功能分析
        6.1 材料和方法
            6.1.1 试验材料
            6.1.2 试验方法
        6.2 结果
            6.2.1 小鼠Oct4b的IRES元件启动活性分析
            6.2.2 小鼠Oct4b的IRES元件差异翻译
            6.2.3 小鼠Oct4b在P19细胞分化中的表达变化
            6.2.4 小鼠Oct4b在miPS细胞分化中的表达变化
            6.2.5 小鼠Oct4b在不同细胞分化中的对比
        6.3 讨论
        6.4 小结
结论
论文创新点及下一步研究方向
参考文献
附录
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]Alternative splicing: An important mechanism in stem cell biology[J]. Kenian Chen,Xiaojing Dai,Jiaqian Wu.  World Journal of Stem Cells. 2015(01)
[2]The novel OCT4 spliced variant OCT4B1 can generate three protein isoforms by alternative splicing into OCT4B[J]. Yuan Gao a,b,1,Xia Wang a,1,Jin Han a,Zhifeng Xiao a,Bing Chen a,Guannan Su a,Jianwu Dai a,a Key Laboratory of Molecular Developmental Biology,Institute of Genetics and Developmental Biology,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100190,China b The Graduate School,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100190,China.  遗传学报. 2010(07)
[3]Stem cell pluripotency and transcription factor Oct4[J]. GUANG JIN PAN, ZENG YI CHANG, HANS R. SCHOLER, DUANQING PEI Departments of Pharmacology and Biological Sciences & Biotechnology, Schools of Sciences and Medicine,Tsinghua University, Beijing 100084, China Center for Animal Transgenesis and Germ Cell Research, School of Veterinary Medicine, Department of Animal Biology, University of Pennsylvania, New Bolton Center, 382 West Street Road, Kennett Square, PA 19348, USA,Department of Pharmacology, University of Minnesota, Minneapolis, MN 55455, USA.  Cell Research. 2002(Z2)



本文编号：3174826