鸡Srebp1基因的克隆及其功能片段在大肠杆菌中的表达

发布时间：2021-05-09 12:04

　　固醇调控元件结合蛋白120（Sterol20regulatory20element-binding20protein201,SREBP1）通过调控脂肪生成相关的酶基因的转录,在机体脂类代谢调控中起着重要作用.本研究以21日龄的鸡胚肝组织的cDNA为模板,通过PCR分段克隆Srebp1全长基因的编码区片段,采用生物信息学分析其蛋白质功能结构域,将SREBP1功能结构域的编码片段克隆入原核表达载体pCold20Ⅲ中,在大肠杆菌BL21（DE3）进行该功能片段的诱导表达.结果表明利用该基因内的KpnⅠ和NotⅠ两个限制性酶切位点,成功将鸡Srebp1基因上分别长700,120300,12050020bp203个片段依次插入pcDNA3.1（+）质粒的Hind20Ⅲ和XhoⅠ酶切位点之间,获得全长Srebp1基因编码片段;在15℃和异丙基硫代半乳糖苷（Isopropyl20β-D-Thiogalactoside,IPTG）的诱导条件下,pCold20Ⅲ-g20Srebp1-1125重组表达质粒在大肠杆菌BL21（DE3）中成功表达出重组蛋白gSREBP1-1125;SDS-PAGE电泳结果显示... 

【文章来源】：常熟理工学院学报. 2020,34(05)

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 鸡Srebp1基因全长编码区片段的克隆
        1.2.2 鸡SREBP1蛋白质序列结构分析
        1.2.3 鸡SREBP1功能多肽的原核重组表达载体的构建
        1.2.4 gSREBP1-1125重组蛋白的诱导表达
        1.2.5 从菌体中初步分离gSREBP1-1125重组蛋白
        1.2.6 可溶性表达的gSREBP1-1125重组蛋白的层析
        1.2.7 从包涵体中纯化获得可溶性gSREBP1-1125重组蛋白
2 结果与分析
    2.1 鸡Srebp1基因编码区片段的克隆
    2.2 鸡SREBP1蛋白序列和结构分析
    2.3 鸡SREBP1功能多肽片段的重组原核表达载体构建
    2.4 重组蛋白gSREBP1-1125的诱导表达
    2.5 重组蛋白gSREBP1-1125的纯化
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡HNF4α蛋白的原核表达、纯化及特异性抗体制备[J]. 王中亮,胡悦,郁建锋,陈珏,马丽晨,陈迟迟,姚文,顾志良.  农业生物技术学报. 2019(05)
[2]鸡HNF1α在大肠杆菌中的表达及其纯化[J]. 郁建锋,张芸,王中亮,李洁,张燕萍,龚道清,顾志良.  农业生物技术学报. 2018(03)
[3]鸡SREBP1基因抗血清制备及组织表达特性分析[J]. 王丽,那威,王宇祥,王彦博,王宁,李玉茂,李辉.  细胞与分子免疫学杂志. 2010(12)



本文编号：3177274