NLS-GFP融合基因植物表达载体的构建与应用

发布时间：2021-05-11 18:24

　　植物细胞高度分隔成不同的膜亚细胞结构,在不同的地点适当地装配相关的蛋白来执行特定的细胞反应。细胞核是细胞的控制中心,以高度协调的方式进行蛋白质表达和运输。细胞核定位信号（nuclear localization signal, NLS）能够促进蛋白定位于细胞核中,对研究蛋白的细胞生物学功能有重要作用。基于目前NLS植物表达载体存在局限性,本研究用无缝克隆技术,将NLS与绿色荧光蛋白基因（green fluorescent protein gene, GFP）融合,插入植物双元表达载体pRI101-AN中,获得一个新的p RI101-NLS-GFP植物表达载体。利用农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导瞬时表达体系在本氏烟（Nicotiana benthamiana）中表达pRI101-NLS-GFP,以未融合NLS的pRI101-GFP为对照,荧光观察表明NLS-GFP融合蛋白主要聚集在细胞核,而pRI101-GFP荧光遍布整个细胞。同时利用马铃薯晚疫病致病疫霉菌（Phytophthora infestans）分泌的精氨酸-某氨基酸-亮氨酸-精氨酸（argin... 

【文章来源】：农业生物技术学报. 2020,28(07)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料与主要试剂
    1.2 GFP和NLS-GFP融合基因的获得
    1.3 p RI101-GFP和p RI101-NLS-GFP表达载体构建
    1.4 p RI101-GFP-PITG＿04314和p RI101-NLS-GFP-PITG＿04314表达载体构建
    1.5 农杆菌介导的基因瞬时表达分析
    1.6 致病疫霉菌接种和病斑面积统计
2 结果与分析
    2.1 GFP和NLS-GFP融合基因的克隆
    2.2 重组表达质粒p RI101-GFP和p RI101-NLS-GFP的构建及亚细胞定位
    2.3 重组表达质粒p RI101-GFP-PITG＿04314和p RI101-NLS-GFP-PITG＿04314的构建及亚细胞定位
    2.4 效应蛋白PITG＿04314的毒性功能分析
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]植物细胞质介导GFP-NLS蛋白入核转运的HeLa细胞系统的建立[J]. 李瑞沙,洪强,周树敏,张红莉,李杨,张卫.  中国生物化学与分子生物学报. 2017(01)
[2]农杆菌介导的pCB302-3载体在本氏烟中瞬时表达条件优化[J]. 孙春莲,王洪洋,田振东.  华中农业大学学报. 2015(03)
[3]几种新型植物基因表达载体的构建方法[J]. 张阳璞,杨淑慎.  生物工程学报. 2015(03)
[4]细胞核在植物防御反应中的作用[J]. 尹超,李梅,刘昱辉.  生物技术进展. 2013(01)
[5]马铃薯产业的现状与发展[J]. 谢从华.  华中农业大学学报(社会科学版). 2012(01)
[6]一种快速高效构建植物表达载体的方法[J]. 韩凯,翁建峰,郝转芳,李新海,李明顺,张德贵,白丽,张世煌,薛吉全,谢传晓.  玉米科学. 2012(01)



本文编号：3181890