甘蓝型油菜尿卟啉原Ⅲ合成酶基因BnHemd的克隆和功能分析

发布时间：2021-05-11 21:52

　　为探讨油菜尿卟啉原Ⅲ合成酶基因Bn Hemd的功能及其与叶绿素合成的关系,促进光合效率和产量的提升,利用基因编辑技术对甘蓝型油菜中双11号中该基因在A9和C8染色体上的两个拷贝进行编辑。从中双11号中克隆到基因Bn A09.Hemd和Bn C08.Hemd,CDS序列分别为885 bp和876 bp,均由9个外显子构成,各编码294和291个氨基酸残基。Bn Hemd蛋白性质与结构分析结果表明,甘蓝型油菜中基因Bn Hemd的两个拷贝的蛋白理化性质十分相似,均为不稳定蛋白,相对分子质量分别为31.97 k D和31.40 k D。系统进化树分析表明,Bn A09.Hemd和Bn C08.Hemd分别与白菜和甘蓝中的同源基因亲缘关系最近。荧光定量PCR结果表明,Bn Hemd在中双11号的根、茎、叶、花蕾、种子和角果皮中均有表达,在角果皮和花蕾中的表达量远高于根、茎、叶。初步的功能分析结果表明,中双11号中该基因两个拷贝同时编辑的植株表现为:叶绿素含量显著减少、光合速率降低、生长迟缓,表明甘蓝型油菜BnHemd对叶绿素合成起重要作用,同时影响光合效率和生长发育。 

【文章来源】：中国油料作物学报. 2020,42(03)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 甘蓝型油菜BnHemd基因CDS序列的克隆
    1.3 氨基酸序列分析及系统进化树构建
    1.4 基因编辑载体的构建
    1.5 农杆菌介导的油菜遗传转化
    1.6 转基因植株的种植
    1.7 转基因植株的叶绿素相对含量与光合速率的测定
    1.8 实时荧光定量（qRT-PCR)
2 结果与分析
    2.1 甘蓝型油菜BnHemd基因的克隆
    2.2 BnHemd蛋白性质与结构预测
    2.3 BnHemd蛋白同源性比对及系统进化树分析
    2.4 BnHemd基因的表达分析
    2.5 BnHemd初步功能分析
        2.5.1 转化苗编辑情况检测
        2.5.2 编辑植株的初步表型分析
3 讨论与结论


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]低温条件下小麦返白系中尿卟啉原Ⅲ合成酶基因的表达模式与分子特征分析[D]. 梁广旺.西北农林科技大学 2012



本文编号：3182170