黄酒酵母一个新基因的功能分析及低产尿素酵母菌株的筛选

发布时间：2021-05-15 18:50

　　酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）是黄酒发酵的主导微生物,也是影响黄酒品质的关键因素。黄酒是我国特有的古酒,具有悠久的历史,黄酒酵母经历了不断的进化和适应黄酒发酵环境,形成它独特的发酵优势。然而,相对于日本清酒,欧美葡萄酒的酿酒酵母菌株,黄酒酵母菌株的研究报道较少,尤其在基因功能研究方面。实验室前期筛选得到一株具有较高酒精耐受性的单倍体黄酒酿造菌株D2,通过生物信息学分析比较它与模式实验菌株S288c在基因组层面的差异,发现基因g5170所编码蛋白质含有可催化酰胺基（CO-NH2）水解生成羧酸、胺或氨反应的酰胺酶（amidase）,预示此基因对黄酒酵母菌株的生长与代谢可能有重要作用。实验室已经对新基因做了功能性研究与验证,发现D2敲除新基因g5170后乙醇耐受性降低,所以预测新基因可能与乙醇耐受性有关。本实验通过载体构建,将新基因g5170导入模式酵母菌BY4741中表达,并通过RT-PCR实验做了表达验证。在乙醇耐受性实验中发现重组酵母菌株对乙醇的耐受性和生长速率都有所提高,此结果进一步了验证新基因g5170可能与乙醇耐受性有关。为进一步培育优良的黄酒酵母菌... 

【文章来源】：浙江工商大学浙江省

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 前言
    1.1 黄酒概述
        1.1.1 黄酒的历史及其特点
        1.1.2 黄酒酿造工艺特点
        1.1.3 酿酒酵母在黄酒酿造中的作用
    1.2 影响黄酒品质的因素
        1.2.1 乙醇对酵母菌生长发酵的影响
        1.2.2 黄酒中的氨基甲酸乙酯(EC)
    1.3 黄酒产业发展方向
        1.3.1 黄酒酵母菌株基因功能研究
        1.3.2 优良菌株的筛选
    1.4 生物信息学分析
    1.5 本研究的目的、内容以及意义
第2章 黄酒酵母一个新基因的功能分析
    2.1 实验的背景及意义
    2.2 实验仪器与材料
        2.2.1 培养基
        2.2.2 实验相关试剂
        2.2.3 实验相关菌株及质粒
    2.3 实验方法
        2.3.1 生物信息学分析
        2.3.2 g5170 基因功能研究分析
        2.3.3 重组酵母菌株的构建流程图
        2.3.4 酵母菌的活化及小量基因组的提取
        2.3.5 目的基因g5170 的扩增
        2.3.6 质粒的提取
        2.3.7 目的基因g5170 和质粒pYES2 的双酶切
        2.3.8 重组质粒的构建
        2.3.9 大肠杆菌感受态的制备及重组质粒的转化
        2.3.10 菌落PCR验证
        2.3.11 提取质粒测序验证
        2.3.12 醋酸锂介导的高效酵母转化
        2.3.13 酵母重组子菌落PCR验证
        2.3.14 重组酵母菌株半乳糖诱导前后生长动力测定
        2.3.15 重组酵母菌株酒精胁迫环境下生长动力测定
        2.3.16 重组酵母菌株外源基因转录(RT-PCR)定性检测
        2.3.17 重组酵母菌株外源蛋白表达(SDS)检测
        2.3.18 实验数据统计分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 重组酵母菌株的构建结果
        2.4.2 重组酵母菌株半乳糖诱导前后生长动力
        2.4.3 重组酵母菌株酒精胁迫环境下生长曲线
        2.4.4 重组酵母外源基因表达检测(RT-PCR)
        2.4.5 基因表达量检测(RNA-Seq)
        2.4.6 初步观察重组酵母的蛋白表达
    2.5 本章小结
第3章 低产尿素酵母菌株的筛选及相关基因分析
    3.1 实验背景及意义
    3.2 实验仪器与材料
        3.2.1 主要培养基
        3.2.2 仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 酵母菌株的分离活化
        3.3.2 精氨酸利用培养
        3.3.3 酵母菌基因组DNA提取
        3.3.4 酵母菌cDNA的合成
        3.3.5 精氨酸代谢相关基因分析
        3.3.6 黄酒发酵实验
    3.4 实验结果
        3.4.1 不同黄酒酵母菌株对精氨酸利用分析
        3.4.2 CAR1 基因相对表达量分析
        3.4.3 模拟黄酒发酵液中尿素、还原糖和酒精含量测定
    3.5 本章小结
第4章 结论与展望
    4.1 结论
    4.2 展望
参考文献
致谢



本文编号：3188160