广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌3种毒力基因检测及tlh基因的蛋白表达

发布时间：2021-05-16 16:47

　　采用PCR技术检测分离自广西钦州、北海和防城港3市凡纳滨对虾样品中的67株副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）3种毒力基因tdh、trh和tlh的携带情况,并将tlh基因进行原核表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定分析。结果显示,67株副溶血弧菌均未扩增出tdh和trh基因,而tlh基因检出率为100.0%,所检副溶血弧菌的毒力基因型为tdh^-trh^-tlh⁺。成功构建了原核表达质粒pET-28a-tlh,将其转化至大肠杆菌BL21 （DE3）感受态细胞后,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳检测得到大小约为53 kDa的产物,与预测值相符。经Western blotting鉴定,该重组表达产物能与抗6×His标签的单克隆抗体发生特异性反应。 

【文章来源】：河北渔业. 2020,(08)

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 试验方法
        1.2.1 tdh、trh和tlh3种毒力基因检测
        1.2.2 tlh基因的生物信息学分析
        1.2.3 tlh基因原核表达载体构建
        1.2.4 原核表达载体的诱导表达
        1.2.5 原核表达产物SDS-PAGE和Western blotting鉴定
2 结果与分析
    2.1 tdh、trh和tlh 3种毒力基因检测
    2.2 tlh基因生物信息学分析
    2.3 tlh基因的蛋白表达及鉴定
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]虾源副溶血弧菌致病基因检测与ERIC-PCR分型[J]. 张海强,安伟,肖雨.  上海海洋大学学报. 2019(06)
[2]宁波地区腹泻患者副溶血弧菌毒力基因及耐药性分析[J]. 谢红意,叶鸿雁,周方满,施露梅,葛婷婷,乐旭波.  检验医学. 2019(02)
[3]近岸及河口环境中副溶血弧菌的生态适应性及其主要毒力基因分布特征[J]. 李梦飞,明红霞,樊景凤,王斌.  生命科学. 2019(02)
[4]副溶血弧菌临床分离株的血清分型及毒力基因分析[J]. 代敏,王大鹏,陈万义,史贤明.  中国食品学报. 2013(02)
[5]2009年四川省副溶血性弧菌血清型、致病力及分子分型研究[J]. 杨小蓉,李薇薇,赵晋,蒋德勇,黎明,裴晓燕,徐耀方,何雪莲,何树森.  预防医学情报杂志. 2013(01)
[6]宁波市小水产品中副溶血性弧菌的血清型、毒力及耐药性研究[J]. 徐奋奋,徐景野,宋启发,裘立晓,陈美芬,金晓霞.  中国食品卫生杂志. 2007(04)
[7]副溶血弧菌的分子生物学研究进展[J]. 蔡潭溪,蒋鲁岩,黄克和.  中国人兽共患病杂志. 2005(10)
[8]副溶血弧菌tlh基因的克隆、表达及功能的研究[J]. 李志峰,聂军,戴迎春,刘翼,陈清,俞守义.  中国人兽共患病杂志. 2004(03)

博士论文
[1]抗副溶血弧菌TLH单链抗体的淘选与功能研究[D]. 王荣智.福建农林大学 2012
[2]副溶血弧菌tdh、trh和tlh基因的克隆、表达及基因敲除对其溶血活性的影响[D]. 赵永刚.中国海洋大学 2010

硕士论文
[1]海水养殖源弧菌耐药性调查与致病性弧菌毒力基因检测[D]. 胡梦华.上海海洋大学 2015
[2]锯缘青蟹副溶血性孤菌分离鉴定及抗TLH单克隆抗体的制备[D]. 陈华.福建农林大学 2007



本文编号：3190048