砖红绒盖牛肝菌三个发育阶段的差异表达基因筛选及其功能初步分析

发布时间：2021-05-18 13:06

　　砖红绒盖牛肝菌（Xerocomus spadiceus）在云南分布广,经济价值高,深受人们喜爱。其隶属于真菌界（Fungi）、担子菌门（Basidiomycota）、伞菌纲（Agaricomycetes）、牛肝菌目（Boletales）、牛肝菌科（Boletaceae）、绒盖牛肝菌属（Xerocomus）。它不仅味道鲜美,兼具抗氧化、抗肿瘤等药用功效。牛肝菌属于外生菌根真菌,与植物共生,其室内纯培养条件下诱导的菌丝体生长缓慢,不会扭结原基,这是人工培养的症结所在。本实验室已能诱导出砖红绒盖牛肝菌小原基,因此本文以该菌种为研究材料,结合前期的转录组测序数据,对其菌丝体、原基、子实体三个发育阶段的差异基因进行分析;通过单样、复合样的多重比较,优选32条差异基因;在此基础上,最终选择3条上调表达基因,利用RT-qPCR技术分别检测其在培养8天、15天的菌丝体、原基中的表达量,并结合它们的数据库功能注释结果预测三个基因在菌丝生长、原基及子实体发育中的作用。这为进一步确定参与原基、子实体形成的候选基因,为子实体发育相关调控基因及其功能的研究奠定基础。主要结果如下:1.对于子实体-vs-原基的差异... 

【文章来源】：云南大学云南省 211工程院校

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 综述
    1 牛肝菌及其国内外研究进展
    2 大型真菌子实体发育的相关研究进展
        2.1 环境因子
        2.2 大型真菌子实体发育调控基因
    3 研究的目的及意义
第二章 材料与方法
    1 材料
    2 试剂和仪器
        2.1 主要试剂
        2.2 主要仪器
    3 方法
        3.1 差异基因筛选
        3.2 同源性比对
        3.3 组织分离培养
        3.4 菌丝体和原基的分子鉴定
        3.5 实时荧光定量分析
第三章 结果与分析
    1 基因的筛选
        1.1 筛选差异基因
        1.2 差异基因的功能预测
    2 基因的同源性分析
        2.1 真菌凝集素基因
        2.2 疏水蛋白基因
    3 菌丝体和原基的分子鉴定
        3.1 DNA的质量检测
        3.2 ITS序列的扩增
        3.3 构建系统进化树
    4 RNA质量检测
    5 荧光定量标准曲线
        5.1 内参基因gapdh梯度稀释样品扩增
        5.2 xs-lectin基因梯度稀释样品扩增
        5.3 xs-hyd1基因梯度稀释样品扩增
        5.4 xs-hyd2基因梯度稀释样品扩增
    6 荧光定量PCR
        6.1 真菌凝集素基因xs-lectin
        6.2疏水蛋白基因xs-hyd1
        6.3疏水蛋白基因xs-hyd2
    7 RT-qPCR结果与转录组数据的比较分析
第四章 功能初步分析和讨论
    1 真菌凝集素
    2 疏水蛋白
    3 展望
附录
    1 gapdh基因的序列
    2 xs-1ectin基因的序列
    3 xs-hyd1基因的序列
    4 xs-hyd2基因的序列
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]金针菇转运蛋白基因fv-mfs1的序列与表达分析[J]. 仝宗军,严俊杰,张磊,黄蓉梅,徐伟南,韩星,许鸣凤,陶永新,谢宝贵.  食用菌学报. 2017(03)
[2]外源添加皂苷对斑玉蕈生长发育的影响[J]. 陈辉,冯川,陈明杰,赵静,汪虹,王倩,张津京,冯志勇.  上海农业学报. 2017(03)
[3]糙皮侧耳Pleurotus ostreatus子实体凝集素基因polectin2及其启动子的克隆及功能鉴定[J]. 苏文英,盛立柱,代月婷,宋冰,付永平,李玉.  菌物学报. 2017(08)
[4]黑曲霉中疏水蛋白基因种类分析[J]. 张燕,许可,张建国.  生命科学研究. 2017(02)
[5]草菇钙调磷酸酶催化亚基（Vv-CNA）的序列与表达[J]. 汪健芳,徐志周,严俊杰,李肖,张磊,黄李琳,谢宝贵.  南方农业学报. 2017(03)
[6]林芝美味牛肝菌的营养成分分析[J]. 马长中,徐锦华,罗章,钟政昌,辜雪冬.  食品工业. 2017(03)
[7]草菇VEGF信号通路中vv-SPK基因的结构与表达分析[J]. 王健,万芳,李肖,严俊杰,黄李琳,谢宝贵.  福建农业学报. 2017(03)
[8]板栗接种食用菌根真菌的菌根化效果及对幼苗促生效应的研究[J]. 郑来友,童品璋,孙宣军,相聪伟,张倩,许小婉,杨共鸣,斯海平.  林业科学研究. 2017(01)
[9]糙皮侧耳凝集素基因Plectin的克隆和表达分析[J]. 殷朝敏,陈叶叶,卢静,马爱民.  园艺学报. 2017(01)
[10]林芝砖红绒盖牛肝菌的营养成分分析及评价[J]. 马长中,罗章,辜雪冬.  食品科学. 2016(24)

博士论文
[1]光诱导香菇菌丝转色形成机理的研究[D]. 唐利华.上海交通大学 2014
[2]草菇形态建成中差异表达转录因子的筛选及关键基因的功能分析[D]. 孟丽.吉林农业大学 2013
[3]茶树菇、鹿角炭角菌和砖红绒盖牛肝菌凝集素纯化及其免疫调节活性的研究[D]. 刘庆洪.中国农业大学 2004

硕士论文
[1]冷诱导金针菇原基形成的相关基因研究[D]. 李琼洁.华南农业大学 2016
[2]金针菇子实体发育相关基因的功能研究[D]. 罗润.华南农业大学 2016
[3]香菇子实体发育相关基因的克隆及分析[D]. 李海峰.华中农业大学 2010
[4]正红菇菌丝体凝集素的分离纯化与性质研究[D]. 黄维雅.福建师范大学 2010
[5]平菇汁对褐环粘盖牛肝菌生长影响的研究[D]. 段慧.内蒙古农业大学 2010
[6]巴山美味牛肝菌营养成分提取的研究[D]. 李燕平.西华大学 2009



本文编号：3193843