基于CRISPR/Cas9技术进行NLRP3基因稳定敲除细胞株的构建

发布时间：2021-05-25 13:52

　　CRISPR/Cas9技术是由细菌、古细菌的适应性免疫系统CRISPR/Cas系统改造而来的基因编辑技术,该技术一经问世就冲击到了生命科学研究的各个领域。CRISPR/Cas9技术依赖于sgRNA和Cas9对靶基因进行编辑,操作简便、实验周期短、应用广泛。掌握CRISPR/Cas9技术能够为以后的科学研究提供高效有力的工具。NLRP3炎症小体是免疫系统的重要组成成分,除了与炎症疾病有关,也有研究显示NLRP3炎症小体影响癌症的发生、发展。已经有研究利用RNAi技术证明NLRP3炎症小体与乳腺癌的增殖,侵袭和转移有着相关性,但是由于RNAi技术本身的局限性,NLRP3炎症小体与乳腺癌相关性的机制还没有被阐述清楚。本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术构建NLRP3基因稳定敲除的MDA-MB-231、MCF-7细胞株,为以后研究NLRP3炎症小体与MDA-MB-231、MCF-7细胞生长、增殖的关系奠定基础。HEK-293T细胞是常用的工具细胞,在构建NLRP3基因敲除的乳腺癌细胞株的同时,构建NLRP3基因敲除的HEK-293T细胞株,以期能够深入研究CRISPR/Cas9技术的操作要... 

【文章来源】：山东师范大学山东省

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词中英文对照表
第一章 综述
    1 基因编辑技术发展历史
    2 CRISPR/Cas技术的结构与机制
    3 CRISPR/Cas系统的分类
    4 CRISPR/Cas9 技术的应用
    5 CRISPR/Cas9 技术面临的问题和挑战
    6 NLRP3 炎症小体
    7 MDA-MB-231 细胞、MCF-7 细胞和HEK-293T细胞简述
    8 本论文选题的依据及意义
第二章 材料与方法
    1 材料
        1.1 细胞系、菌株和载体
        1.2 常用试剂
        1.3 仪器
        1.4 常用实验试剂配制
    2 方法
        2.1 NLRP3 敲除靶点的设计
        2.2 PX459 重组载体的构建与鉴定
        2.3 细胞转染与NLRP3 基因敲除细胞株的获得
第三章 结果与讨论
    1 结果
        1.1 NLRP3 基因敲除靶点的选择
        1.2 重组载体的鉴定
        1.3 MDA-MB-231、MCF-7、HEK-293T细胞转染效率的检测
        1.4 嘌呤霉素筛选浓度测定
        1.5 NLRP3 敲除靶点打靶效率检测
        1.6 PCR及测序鉴定NLRP3 基因编辑情况
    2 讨论
第四章 结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]工程细胞单克隆筛选及单克隆源性验证[J]. 江一帆,董静,魏敬双.  中国生物工程杂志. 2019(04)
[2]提高CRISPR/Cas9系统靶向编辑效率方法的研究进展[J]. 赵盼盼,王丽,袁园园,常卫东,王林嵩.  江苏农业科学. 2017(01)
[3]直接消化法分离单克隆贴壁细胞[J]. 赵迪诚,龙志高,郑多,戴和平,夏昆.  湖南医科大学学报. 2002(06)



本文编号：3205452