BpAP2基因及其启动子的克隆与功能分析

发布时间：2021-05-25 19:22

　　APETALA2（AP2）家族作为 APETALA2/ethylene-responsive element binding protein（AP2/EREBP）转录因子家族的亚族之一,广泛参与植株的生长发育、胁迫应答和多种生理生化反应。AP2基因作为该家族中的一员,在不同植物的多种组织中都有表达。启动子从转录水平上调控基因表达,基因特异性启动子通过顺式作用元件直接调控下游基因的表达时间、表达部位以及表达强度。本试验从白桦（Betula platyphylla Suk.）中克隆了AP2基因及其系列启动子片段,具体结果如下:（1）白桦AP2基因启动子的克隆及其转录活性分析。从白桦基因组中扩增长为2308bp的启动子序列proBpAP2及6个AP2基因5’端缺失的启动子片段Pn（n=1,2,……,5,6）。采用双酶切法将proBpAP2及6个5’端缺失片段分别克隆至pBI121植物表达载体中,构建含特异启动子的表达载体proBpAP2::GUS及Pn::GUS（n=1,2,……,5,6）。用农杆菌介导法浸染白桦和拟南芥,进行GUS组织化学染色分析,结果表明proBpAP2及6个缺失片段启动... 

【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 白桦的研究进展
    1.2 AP2基因及其转录因子家族的研究进展
    1.3 启动子的研究进展
        1.3.1 结构及分类
        1.3.2 克隆及分析方法
    1.4 研究的目的意义
2 BpAP2基因启动子及其缺失片段的克隆与表达分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株与载体
        2.1.3 主要试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 白桦组培苗DNA的提取
        2.2.2 BpAP2基因启动子及其系列缺失片段的扩增
        2.2.3 TA克隆
        2.2.4 目的基因与表达载体的连接
        2.2.5 重组质粒转化感受态
        2.2.6 启动子功能元件分析
        2.2.7 农杆菌渗透法转化白桦及拟南芥
        2.2.8 GUS组织化学染色分析
        2.2.9 激素处理转化后的拟南芥
        2.2.10 qRT-PCR表达模式分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 BpAP2基因启动子及其系列缺失片段表达载体的构建
        2.3.2 白桦BpAP2基因系列启动子序列分析及顺式元件预测
        2.3.3 proBpAP2及其系列缺失片段的转录活性分析
        2.3.4 激素对白桦BpAP2启动子活性的影响
    2.4 讨论
3 BpAP2基因过表达载体的构建与遗传转化
    3.1 实验材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株与载体
        3.1.3 主要试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 CTAB法提取白桦RNA
        3.2.2 反转录成cDNA
        3.2.3 BpAP2基因编码区的扩增
        3.2.4 TA克隆
        3.2.5 目的基因与表达载体的连接
        3.2.6 BpAP2转基因植物的获得
        3.2.7 形态学观察及数据统计
        3.2.8 qRT-PCR表达模式分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 BpAP2基因植物过表达载体的构建
        3.3.2 BpAP2过表达载体转化拟南芥
        3.3.3 BpAP2转基因拟南芥的形态观察及数据统计
        3.3.4 BpAP2基因对拟南芥根毛和毛状体生长的影响
    3.4 讨论
结论
参考文献
附录
攻读学位期间发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]白桦4CL基因启动子克隆及表达分析[J]. 李萌,哈努拉·塔斯肯,陈卓,田智丽,王超.  中国农学通报. 2017(05)
[2]苹果果实β-半乳糖苷酶基因启动子的克隆与功能分析[J]. 蒋小兵,杨惠娟,王豪杰,张波,杨亚州,赵政阳.  西北植物学报. 2017(01)
[3]白桦BpGT14基因启动子克隆及表达活性分析[J]. 李蕾蕾,孙丰坤,李天宇,寇萍,詹亚光,曾凡锁.  北京林业大学学报. 2016(07)
[4]一种基于农杆菌介导的拟南芥瞬时转化技术优化[J]. 郭勇,王玉成,王智博.  东北林业大学学报. 2016(06)
[5]真核启动子研究进展[J]. 汤方,涂慧珍.  林业科技开发. 2015(02)
[6]根毛的生长发育及其遗传基础[J]. 张德健,夏仁学,曹秀.  植物生理学报. 2015(01)
[7]牛结蛋白基因启动子的克隆及功能的初步分析[J]. 杜巍,李树峰,佟慧丽.  中国畜牧兽医文摘. 2015(01)
[8]马铃薯块茎特异性启动子克隆及其驱动的hIL12表达载体构建[J]. 杨加伟,李伟,葛正龙.  遵义医学院学报. 2014(04)
[9]一个新水稻根尖特异表达启动子的分离与鉴定[J]. 赵红玉,徐磊,魏溪涓,邓敏娟,王芳,易可可.  中国水稻科学. 2014(04)
[10]棉花种子特异性启动子的克隆及序列分析[J]. 周佳佳,孙觅真,张素青,伊海法,邢会贤,王丽媛,宋宪亮,孙学振.  山东农业科学. 2014(06)

硕士论文
[1]莱茵衣藻MYB、AP2基因干涉对油脂含量的影响及其启动子区甲基化初步分析[D]. 高寒.黑龙江八一农垦大学 2016
[2]转cAPX基因杨树的获得及cAPX基因启动子序列的克隆与分析[D]. 姚叶.山东师范大学 2013
[3]大豆PKS4基因及其启动子的克隆、表达载体构建及植物转化[D]. 李俊英.吉林农业大学 2012
[4]橡胶树SUT基因HbSUT3与HbSUT5启动子的克隆与功能分析[D]. 辛鲁生.海南大学 2012
[5]玉米PAB5基因启动子的克隆与功能分析[D]. 郑丽莉.安徽农业大学 2011
[6]枳CBF1类似基因（PtCBF1）启动子功能分析[D]. 祝梅.华中农业大学 2009



本文编号：3205874