厚壳贻贝IRAKs基因克隆及相关免疫功能探究

发布时间：2021-05-31 17:30

　　随着人类对海产品需求量的增大,海水养殖发展不断加速,而伴随着经济的发展,沿海工业化也愈发迅速,导致海水养殖环境不断恶化,而近海水域的生态环境对贝类养殖业经济发展至关重要。因此,研究海洋贝类的免疫生物学机制将为其健康养殖提供重要理论依据。厚壳贻贝（Mytilus coruscus）作为滤食性动物,分布广泛,生长能力强,但活动能力差,在日常环境中广泛接触海洋环境中各种病原微生物,但由此引发的疾病感染并不多见,说明其体内存在较强的抗菌感染机制,因此研究厚壳贻贝的天然免疫防御机制将为其健康养殖提供重要理论参考。白细胞介素1受体相关激酶（IRAKs）是Toll样受体（TLR）介导的信号通路的重要接头分子,在生物的天然免疫系统中起重要作用。因此,本论文对厚壳贻贝TLR信号通路中的免疫因子IRAK进行了鉴定、系统进化分析及相关表达机制和体外蛋白表达研究,主要取得的研究结果如下:1.本文基于厚壳贻贝转录组数据,获得了白细胞介素1受体相关激酶a（命名为McIRAK-a,GenBank登录号:MK592614）和b（命名为McIRAK-b,GenBank登录号:MK592615）的cDNA全长序列,McI... 

【文章来源】：浙江海洋大学浙江省

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

厚壳贻贝鳃组织RNA凝胶电泳图

第二章厚壳贻贝IRAK-a基因克隆与序列分析192.3结果与讨论2.3.1RNA提取结果实验通过Trizol法成功提取厚壳贻贝的鳃组织得RNA，将获得的RNA进行琼脂糖凝胶电泳用紫外凝胶成像系统分析条带。如图2-1，28SrRNA、18SrRNA和5SrRNA条带都很明显，微量核酸蛋白检测仪对总RNA浓度和质量的检测显示，OD260/280比值均处于1.8-2.1之间，OD260/230处在2.0-2.4之间，提示此法适用于厚壳贻贝总RNA的提取，并可以用于cDNA第一链合成。图2-1厚壳贻贝鳃组织RNA凝胶电泳图Fig2.1ResultsofelectrophoreticdetectionofRNAfromgillstissueofM.coruscus2.3.2McIRAK-a核心片段扩增结果以McIRAK-a核心片段设计的引物进行温度梯度PCR扩增，所得目的片段约700bp，符合预期设计片段大小，割胶回收后，送公司测序，并将送测结果在NCBI数据库中比对，结果显示为目标序列（图2-2）。图2-2McIRAK-a核心片段PCR产物注：M表示DNAMarkerDL1000Fig2.2McIRAK-acorefragmentPCRproductNote:MmeansDNAMarkerDL1000

第二章厚壳贻贝IRAK-a基因克隆与序列分析21图2-3A厚壳贻贝IRAK-a的全长序列分析注：起始密码子ATG用黑色线框表示，终止密码子TAA用星号*表示。下划线标注的为IRAK-a结构域。灰色区域表示蛋白激酶ATP结合位点和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的活性位点。绿色，蓝色和黄色分别表示丝氨酸位点，酪氨酸位点和苏氨酸位点。Fig2.3AFull-lengthsequenceanalysisofIRAK-ainM.coruscusNote:ThestartcodonATGisindicatedbyablackwireframe,andthestopcodonTAAisindicatedbyanasterisk*.TheIRAK-adomainisunderlined.ThegrayareaindicatestheproteinkinaseATPbindingsiteandtheactivesiteofserine/threonineproteinkinase.Green,blueandyellowindicateserine,tyrosineandthreoninesites,respectively.

【参考文献】：
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本文编号：3208665