靶向IL-6基因慢病毒介导RNA干扰治疗小鼠胶原诱导性关节炎实验性研究

发布时间：2021-06-06 04:37

　　目的:研究靶向白介素6（interleukin 6,IL-6）基因慢病毒介导RNA干扰治疗小鼠胶原诱导性关节炎（collagen induced arthritis,CIA）的效果及进一步探索IL-6引发关节炎的潜在机制。方法:第一部分:构建靶向IL-6的三条小干扰RNA（small interfering RNAs,siRNAs）,siRNAs分别转染至小鼠巨噬细胞J774A.1内,实时荧光定量（quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR）筛选干扰效率最高的siRNA序列。根据序列构建靶向IL-6慢病毒（LV-IL6-RNAi）颗粒,病毒颗粒感染J774A.1细胞,荧光显微镜下观察确定病毒感染最佳滴度,RT-qPCR检测病毒干扰效率。在体内,利用DBA/1小鼠构建CIA模型。LV-IL6-RNAi组为实验组,以空病毒（LV-NC-RNAi）为阴性对照组,甲氨蝶呤（Methotrexate,MTX）为阳性对照组,分组注射治疗后进行CIA关节炎评分。酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorben... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

靶向IL-6的高效siRNA筛选

青岛大学硕士学位论文9图2慢病毒颗粒感染J774A.1细胞滴度筛眩A.200×放大倍数镜下，自上而下当MOI=1，10，100时，J774A.1细胞表达GFP的情况（为明场与激发光波长488nm暗场的叠加显示）；B.J774A.1细胞不同MOI值下被感染表达GFP数量。实验独立重复至少3次，数据用Mean±S.E.M表示，*P＜0.05。

结果10图3LV-IL6-RNAi和LV-NC-RNAi分别感染J774A.1细胞，两组细胞IL-6、IL-1β和TNF-ɑ的mRNA表达水平。实验独立重复至少3次，数据用Mean±S.E.M表示，*P＜0.05。2靶向IL-6慢病毒颗粒显著减少CIA小鼠关节炎评分LV-IL6-RNAi和LV-NC-RNAi经小鼠关节腔内注射及MTX经小鼠腹腔内注射后，行每日观察记录小鼠状况，进行关节炎评分。评分结果显示：LV-IL6-RNAi、LV-NC-RNAi和MTX组小鼠均在d28至d35内开始发病，d35后，LV-IL6-RNAi组小鼠关节炎评分出现下降，直到d42，三组关节炎评分为10.29±0.64，5.43±0.37，7.14±0.51和LV-IL6-RNAi组的关节炎评分显著的低于LV-NC-RNAi组和MTX组（F=22.49，P<0.01），差异具有统计学意义，见图4。

【参考文献】：
期刊论文
[1]HSV-1型载体介导IL-1Rα关节腔内注射治疗兔膝关节炎[J]. 吴仪,李建明,孔瑛,陈丁,刘博,王万春.  中南大学学报(医学版). 2013(06)
[2]白细胞介素1受体拮抗蛋白间接体内转基因抑制骨关节炎软骨破坏[J]. 郭万首,马丽,李子荣.  中华医学杂志. 2004(10)



本文编号：3213623