协同致死靶向恶性肿瘤中突变型ERBB3和p53的分子机制研究
发布时间：2021-06-07 17:00
癌症主要是由基因突变引发的疾病,其发生率及死亡率居高不下,严重影响我国乃至全球人类健康。目前,除了常规放化疗外,针对各类突变癌基因的靶向治疗备受青睐。然而在临床实践中,靶向治疗仍然面临诸多问题,比如,一方面肿瘤细胞能够逃逸靶基因信号通路,获取新的生存方式,从而导致靶向药物失效;另一方面,很多已知的致癌基因无法成药。因此,筛选和鉴定可成药的靶基因成为解决问题的关键。协同致死效应是指当某两个特定的基因同时突变失活时,会导致细胞死亡的生物学效应;而这两个基因单独任何一个突变失活都不会导致细胞死亡。利用这一效应,PARP抑制剂治疗BRCA突变肿瘤的方法应运而生。此后,基于协同致死效应的功能筛选业已成为肿瘤领域药物研发的重要方向。本研究课题基于协同致死效应在胃肠道肿瘤中筛选靶向突变ERBB3及突变p53基因的新型效应分子,并通过功能研究探究协同致死分子机制。课题1,通过分析癌症基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库,我们发现ERBB3基因在人类胃肠道癌症中高频突变,利用携带突变型ERBB3基因（Mut-ERBB3）和野生型ERBB3基因（WT-ERBB3）的...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：144 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
ERBB3蛋白的热点突变图谱
浙江大学博士学位论文正文课题1研究内容与结果7Lapatinib（一种HER2的小分子抑制剂），Apatinib（一种VEGFR2的小分子抑制剂），Linsitinib（一种IGF-1R的小分子抑制剂），Tivantinib（一种c-MET的小分子抑制剂）以及BGJ398（一种FGFR1-3的抑制剂）处理72小时后的细胞致死效果。细胞活力的热图结果显示（如图1-3），这5株细胞系对Gefitinib，Lapatinib，Apatinib，Linsitinib和Tivantinib耐药响应没有显著性的差异。但值得注意的是，携带ERBB3-E928G突变的CW-2细胞系对FGFR1-3抑制剂BGJ398显著耐受。图1-3初步药物筛选发现CW-2细胞系对BGJ398显著耐受图1-3将5种细胞系分别铺板于96孔板中，每孔5000个细胞。待细胞贴壁后，配制如图不同浓度的RTKs抑制剂（包括Gefitinib，Lapatinib，Apatinib，Linsitinib，Tivantinib和BGJ398）分别处理铺板于96孔板中的5种细胞系，处理3天后利用Celltiter-Glo方法检测细胞活力，并分析结果。为了进一步证实此实验结果，我们挑选CW-2细胞系与WT-ERBB3细胞系AGS同时给予2.5μM的BGJ398处理，分别在药物处理3天，5天，7天后检测细胞活力。结果显示，WT-ERBB3细胞系AGS的细胞活力在FGFR1-3抑制剂BGJ398处理的7天内显著下降，而Mut-ERBB3细胞系CW-2的细胞活力几乎不受影响（如图1-4）。
浙江大学博士学位论文正文课题1研究内容与结果8图1-4CW-2细胞系比AGS细胞系对BGJ398处理呈现不同时间点的耐受图1-4利用培养基配制终浓度为2.5μM的BGJ398，分别处理贴壁于96孔板中的CW-2和AGS细胞系，在处理3天，5天和7后利用Celltiter-Glo方法检测细胞活力结果，并分析结果。BGJ398作为一种选择性FGFR抑制剂，可以靶向作用于FGFR1/2/3，在无细胞试验中对FGFR1/2/3的IC50分别为0.9nM/1.4nM/1nM[32,33]。然而，FGFR家族成员还包含FGFR4[34]，且目前还没有BGJ398对FGFR4有抑制效果的相关研究报道。FGFR4作为成纤维细胞生长因子受体FGFR家族成员，其在胃肠道癌症的发生发展中也扮演重要角色，FGFR4的过表达和突变都被发现能够促进胃肠道癌症细胞的生长[35-37]。因此，为了进一步探索ERBB3-E928G突变细胞对FGFR4抑制剂的肿瘤杀伤响应，我们挑选出两种FGFR4的选择性抑制剂BLU554和BLU9931，利用不同浓度的BLU554和BLU9931分别处理CW-2和AGS细胞系，结果显示CW-2和AGS细胞系对这两种FGFR4抑制剂的响应并没有显著性差异（如图1-5）。提示ERBB3的E928G突变可能不影响细胞对FGFR4抑制剂的肿瘤杀伤响应。
【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA methylation detection methods used in colorectal cancer[J]. Yu-Xia Zhan,Guang-Hua Luo. World Journal of Clinical Cases. 2019(19)
[2]突变型p53与其合成致死基因的研究进展[J]. 刘同阳,郭海强,朱美妍,黄英泽,贾舒婷,罗瑛,张继虹. 遗传. 2015(04)
本文编号：3216959
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：144 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
ERBB3蛋白的热点突变图谱
浙江大学博士学位论文正文课题1研究内容与结果7Lapatinib（一种HER2的小分子抑制剂），Apatinib（一种VEGFR2的小分子抑制剂），Linsitinib（一种IGF-1R的小分子抑制剂），Tivantinib（一种c-MET的小分子抑制剂）以及BGJ398（一种FGFR1-3的抑制剂）处理72小时后的细胞致死效果。细胞活力的热图结果显示（如图1-3），这5株细胞系对Gefitinib，Lapatinib，Apatinib，Linsitinib和Tivantinib耐药响应没有显著性的差异。但值得注意的是，携带ERBB3-E928G突变的CW-2细胞系对FGFR1-3抑制剂BGJ398显著耐受。图1-3初步药物筛选发现CW-2细胞系对BGJ398显著耐受图1-3将5种细胞系分别铺板于96孔板中，每孔5000个细胞。待细胞贴壁后，配制如图不同浓度的RTKs抑制剂（包括Gefitinib，Lapatinib，Apatinib，Linsitinib，Tivantinib和BGJ398）分别处理铺板于96孔板中的5种细胞系，处理3天后利用Celltiter-Glo方法检测细胞活力，并分析结果。为了进一步证实此实验结果，我们挑选CW-2细胞系与WT-ERBB3细胞系AGS同时给予2.5μM的BGJ398处理，分别在药物处理3天，5天，7天后检测细胞活力。结果显示，WT-ERBB3细胞系AGS的细胞活力在FGFR1-3抑制剂BGJ398处理的7天内显著下降，而Mut-ERBB3细胞系CW-2的细胞活力几乎不受影响（如图1-4）。
浙江大学博士学位论文正文课题1研究内容与结果8图1-4CW-2细胞系比AGS细胞系对BGJ398处理呈现不同时间点的耐受图1-4利用培养基配制终浓度为2.5μM的BGJ398，分别处理贴壁于96孔板中的CW-2和AGS细胞系，在处理3天，5天和7后利用Celltiter-Glo方法检测细胞活力结果，并分析结果。BGJ398作为一种选择性FGFR抑制剂，可以靶向作用于FGFR1/2/3，在无细胞试验中对FGFR1/2/3的IC50分别为0.9nM/1.4nM/1nM[32,33]。然而，FGFR家族成员还包含FGFR4[34]，且目前还没有BGJ398对FGFR4有抑制效果的相关研究报道。FGFR4作为成纤维细胞生长因子受体FGFR家族成员，其在胃肠道癌症的发生发展中也扮演重要角色，FGFR4的过表达和突变都被发现能够促进胃肠道癌症细胞的生长[35-37]。因此，为了进一步探索ERBB3-E928G突变细胞对FGFR4抑制剂的肿瘤杀伤响应，我们挑选出两种FGFR4的选择性抑制剂BLU554和BLU9931，利用不同浓度的BLU554和BLU9931分别处理CW-2和AGS细胞系，结果显示CW-2和AGS细胞系对这两种FGFR4抑制剂的响应并没有显著性差异（如图1-5）。提示ERBB3的E928G突变可能不影响细胞对FGFR4抑制剂的肿瘤杀伤响应。
【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA methylation detection methods used in colorectal cancer[J]. Yu-Xia Zhan,Guang-Hua Luo. World Journal of Clinical Cases. 2019(19)
[2]突变型p53与其合成致死基因的研究进展[J]. 刘同阳,郭海强,朱美妍,黄英泽,贾舒婷,罗瑛,张继虹. 遗传. 2015(04)
本文编号：3216959
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3216959.html
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