shRNA干扰沉默ERCC1基因对A549/DDP细胞增殖和凋亡影响
发布时间：2021-06-14 23:35
目的:探讨短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）靶向沉默切除修复交叉互补基因组1（ERCC1）对不同浓度顺铂处理的肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP增殖和凋亡的影响。方法:设计并合成靶向人的ERCC1基因shRNA;采用脂质体lipofectamine 2000转染入A549/DDP细胞,通过Real-time PCR和Western Blot分别检测转染前后ERCC1 mRNA和蛋白表达;MTT法检测转染后各组细胞增殖抑制率的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果:成功构建ERCC1-shRNA并转入A549/DDP,ERCC1-shRNA有效抑制ERCC1mRNA和蛋白表达（P<0.05）。与阴性对照组和空白对照组比较,转染后细胞ERCC1增殖抑制率明显升高,IC50值明显下降,细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡率增高（P<0.05）。结论:ERCC1-shRNA能有效沉默A549/DDP细胞中ERCC1基因的表达,细胞增殖显著受抑而凋亡明显增强。
【文章来源】：皖南医学院安徽省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Westernblotting检测
26与阴性对照组和空白对照组比较，##，** P<0.01 3 转染后 A549/DDP 细胞 ERCC1 蛋白表达情况gure3 The expressions of ERCC1 proteins in transfected A549/DDP c MTT 法检测转染后 A549/DDP 对顺铂半数抑制量的变筛选干扰目的基因效率较高的ERCC1-shRNA1组行MTT检测，A549h后,用MTT法检测shRNA1转染组、阴性对照组和空白对照组在不同存活率的变化(顺铂终浓度分别为100、50、25、12.5、6.25、3.12验重复三次。结果表明，A549/DDP细胞转染shRNA1 48h后，与阴
空白对照组 (71.75 ± 4.56) (27.13±3.24)与阴性对照组与空白对照组比较，* P<0.05图5 流式细胞术分析转染ERCC1-shRNA后各组A549/DDP细胞周期变化Figure5 Effects of transfected ERCC1-shRNA on the cell cycles of the A549/DDP cells5 ERCC1-shRNA1 可促进细胞凋亡A549/DDP 细胞经转染 24h 后,分别加入 0、6.25μg/ml 顺铂作用 48h 后,按实验分组收集细胞,用标记了 FITC 的 AnnexinV 作为焚光探针在流式细胞仪上检测细胞凋亡,实验重复三次。在流式细胞仪双变量的散点图上,左下象限（LL）表示活细胞的数目,为(FITC-/PI-)，左上象限（UL）表示细胞收集过程中出现的损伤细胞的数目，右下象限（LR）为早期调亡细胞的数目,为(FITC+/PI-)，右上象限（UR）表示晚期调亡细胞和坏死细胞的数目,为(FITC+/PI+ )。通常细胞调亡率用 UR+LR表示,本实验流式细胞仪分析结果提示 ERCC1-shRNA1 可促进细胞凋亡。顺铂浓度阴性对照组 ERCC1-shRNA1 组 空白对照组
【参考文献】：
期刊论文
[1]非小细胞肺癌中ERCC1和RRM1的表达及临床意义[J]. 周成伟. 中华全科医学. 2016(06)
[2]MDR机制影响大肠癌治疗的研究进展[J]. 徐瑞云,廉蕊,严晓丽,郑纪宁. 承德医学院学报. 2015(05)
[3]RNA干扰抑制ERCC1/ERCC2表达对非小细胞肺癌化疗敏感性影响观察[J]. 彭睿,周航. 中华肿瘤防治杂志. 2015(04)
[4]顺铂对siRNA抑制ERCC1基因表达的A549细胞增殖、凋亡影响[J]. 宋莹,仇秦威,贺智敏,谷依学. 山东医药. 2014(19)
[5]伊利替康联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的近期疗效及毒性反应分析[J]. 刘一范. 中国实用医药. 2014(06)
[6]顺铂对人肺腺癌细胞作用与ERCC1、Bcl-2表达的相关性研究[J]. 金艺凤,何贝,刘东华,王莹. 中国临床药理学与治疗学. 2013(07)
[7]老年晚期非小细胞肺癌化疗方案的临床分析[J]. 赫丽杰,李芹子. 中国医药指南. 2013(16)
[8]鸦胆子油乳联合siRNA-ERCC1对肺腺癌A549/DDP细胞的耐药逆转作用[J]. 丁雨钦,曲杰,张晶晶,吕喜英. 中国实验方剂学杂志. 2012(20)
[9]DNA修复基因多态性与非小细胞肺癌患者含铂方案化疗预后的关系[J]. 金艺凤,蒋静涵,黄群联,王莹,刘东华. 中国老年学杂志. 2012(09)
[10]中国肿瘤登记地区2007年肿瘤发病和死亡分析[J]. 陈万青,张思维,郑荣寿,雷正龙,李光琳,邹小农,赵平. 中国肿瘤. 2011(03)
本文编号：3230443
【文章来源】：皖南医学院安徽省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Westernblotting检测
26与阴性对照组和空白对照组比较，##，** P<0.01 3 转染后 A549/DDP 细胞 ERCC1 蛋白表达情况gure3 The expressions of ERCC1 proteins in transfected A549/DDP c MTT 法检测转染后 A549/DDP 对顺铂半数抑制量的变筛选干扰目的基因效率较高的ERCC1-shRNA1组行MTT检测，A549h后,用MTT法检测shRNA1转染组、阴性对照组和空白对照组在不同存活率的变化(顺铂终浓度分别为100、50、25、12.5、6.25、3.12验重复三次。结果表明，A549/DDP细胞转染shRNA1 48h后，与阴
空白对照组 (71.75 ± 4.56) (27.13±3.24)与阴性对照组与空白对照组比较，* P<0.05图5 流式细胞术分析转染ERCC1-shRNA后各组A549/DDP细胞周期变化Figure5 Effects of transfected ERCC1-shRNA on the cell cycles of the A549/DDP cells5 ERCC1-shRNA1 可促进细胞凋亡A549/DDP 细胞经转染 24h 后,分别加入 0、6.25μg/ml 顺铂作用 48h 后,按实验分组收集细胞,用标记了 FITC 的 AnnexinV 作为焚光探针在流式细胞仪上检测细胞凋亡,实验重复三次。在流式细胞仪双变量的散点图上,左下象限（LL）表示活细胞的数目,为(FITC-/PI-)，左上象限（UL）表示细胞收集过程中出现的损伤细胞的数目，右下象限（LR）为早期调亡细胞的数目,为(FITC+/PI-)，右上象限（UR）表示晚期调亡细胞和坏死细胞的数目,为(FITC+/PI+ )。通常细胞调亡率用 UR+LR表示,本实验流式细胞仪分析结果提示 ERCC1-shRNA1 可促进细胞凋亡。顺铂浓度阴性对照组 ERCC1-shRNA1 组 空白对照组
【参考文献】：
期刊论文
[1]非小细胞肺癌中ERCC1和RRM1的表达及临床意义[J]. 周成伟. 中华全科医学. 2016(06)
[2]MDR机制影响大肠癌治疗的研究进展[J]. 徐瑞云,廉蕊,严晓丽,郑纪宁. 承德医学院学报. 2015(05)
[3]RNA干扰抑制ERCC1/ERCC2表达对非小细胞肺癌化疗敏感性影响观察[J]. 彭睿,周航. 中华肿瘤防治杂志. 2015(04)
[4]顺铂对siRNA抑制ERCC1基因表达的A549细胞增殖、凋亡影响[J]. 宋莹,仇秦威,贺智敏,谷依学. 山东医药. 2014(19)
[5]伊利替康联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的近期疗效及毒性反应分析[J]. 刘一范. 中国实用医药. 2014(06)
[6]顺铂对人肺腺癌细胞作用与ERCC1、Bcl-2表达的相关性研究[J]. 金艺凤,何贝,刘东华,王莹. 中国临床药理学与治疗学. 2013(07)
[7]老年晚期非小细胞肺癌化疗方案的临床分析[J]. 赫丽杰,李芹子. 中国医药指南. 2013(16)
[8]鸦胆子油乳联合siRNA-ERCC1对肺腺癌A549/DDP细胞的耐药逆转作用[J]. 丁雨钦,曲杰,张晶晶,吕喜英. 中国实验方剂学杂志. 2012(20)
[9]DNA修复基因多态性与非小细胞肺癌患者含铂方案化疗预后的关系[J]. 金艺凤,蒋静涵,黄群联,王莹,刘东华. 中国老年学杂志. 2012(09)
[10]中国肿瘤登记地区2007年肿瘤发病和死亡分析[J]. 陈万青,张思维,郑荣寿,雷正龙,李光琳,邹小农,赵平. 中国肿瘤. 2011(03)
本文编号：3230443
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