黄花苜蓿MfNAC35基因的功能分析
发布时间：2021-06-23 12:44
黄花苜蓿具有抗旱、耐寒、耐盐碱等优良特性,是苜蓿抗性育种的重要种质资源,也是十分重要的基因库。NAC转录因子是植物中特有的转录因子家族之一,在植物生长发育、成熟以及适应逆境胁迫中发挥重要作用。本研究克隆获得了黄花苜蓿MfNAC35基因启动子区序列,分析发现其含有抗逆调节相关作用元件。Real-time PCR分析显示MfNAC35在黄花苜蓿根部的表达量较大,在茎中的表达量较少,且在根、茎、叶中的表达均被盐和干旱胁迫上调。酵母实验结果显示MfNAC35具有转录激活功能,且功能域位于蛋白的C端。以植物双元表达载体pBI121（35S-NOS）为骨架,构建超表达载体pBI121（35S-MfNAC35-NOS）,利用农杆菌介导叶盘转化法转化本氏烟草,PCR鉴定筛选获得15株T0代转基因植株,RT-PCR分析显示MfNAC35已在T0代转基因植株中获得表达,且盐或干旱胁迫可调节烟草抗逆相关基因CAT、SOD、P5CS表达的上调,初步表明MfNAC35可能是通过调节抗逆相关基因的表达,进而参与调节抗逆性的分子机理。
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
载体pGBKT7-DBD-MfNAC35（c）示意图
图 2.2 pBI121（35S-MfNAC35-NOS）载体与检测引物位点示意图引物 pBI121-（35S-MfNAC35）F 位点；P2：引物 pBI121-（35S-MfNAC35）R 位点；引物 pBI121-（MfNAC35-NOS）F 位点；P4：引物 pBI121-（MfNAC35-NOS）R 位点Fig.2.2 The sketch map of pBI121 (35S-MfNAC35-NOS) vector and primer landing sitehe site of prime pBI121-（35S-MfNAC35）F; P2: The site of prime pBI121-（35S-MfNAhe site of prime pBI121-（MfNAC35-NOS）F; P4: The site of prime pBI121-（MfNAC3化植株的 PCR 检测 法[71]提取转化植株叶片 DNA 作为模板，以图 2.2 所示设计引物 pBI121-AC35）F 和 pBI121（-35S-MfNAC35）R 以及 pBI121（-MfNAC35-NOS）F 和 5-NOS）R，进行 PCR 鉴定转化 pBI121-（35S-MfNAC35-NOS）的再生植0×PCR Buffer 2.5 μL物 1 2.5 μL物 2 2.5 μLNTPS(2.5 mmol/Leach) 2 μL
图 3.1 MfNAC35 保守结构域分析Fig.3.1Analysis of conserved domains of MfNAC35表 3.1 MfNAC35 基因的氨基酸组成Table3.1Amino acid content of MfNAC35一级结构预测 ProtParam 软件包分析该蛋白的一级结构及其理化性质，结果如表 3.1 和AC35 蛋白分子量约为 33.79kDa，等电点为 6.46，为酸性蛋白，含有 292 、Pro 和 Asp 含量相对较高，分别为 9.2%和 7.2%；带负电荷的残基 (As正电荷的残基(Arg + Lys)为 38 个，推测该蛋白带负电荷；蛋白质的稳定系数定蛋白[76]。氨基酸 数量 百分比 氨基酸 数量 百分比
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同处理对打破野生黄花苜蓿种子硬实的效果研究[J]. 伊风艳,王晓娟,杨鼎,邱晓,孙海莲,贾明,刘思博. 种子. 2018(01)
[2]甘蓝OguCMS育性相关转录因子BoMYB1的转录激活功能分析[J]. 陈玉娟,颉建明,郭盈盈,康俊根. 西北农业学报. 2014(10)
[3]水分胁迫下16个玉米NAC转录因子的序列特征和表达分析[J]. 张进艳,陈芳,李亮,马艺文,王振萍,姜立雁,王化俊,郝转芳. 山西农业科学. 2014(04)
[4]NAC转录因子在植物抗病和抗非生物胁迫反应中的作用[J]. 孙利军,李大勇,张慧娟,宋凤鸣. 遗传. 2012(08)
博士论文
[1]水稻ONAC家族基因重叠表达特性及其在抗病抗逆中的功能研究[D]. 孙利军.浙江大学 2012
[2]中国黄花苜蓿野生种质资源研究[D]. 王俊杰.内蒙古农业大学 2008
硕士论文
[1]野生黄花苜蓿MfNAC3的克隆分析及表达载体的构建[D]. 张芳蜞.内蒙古大学 2017
[2]黄花苜蓿NAC转录因子的初步研究[D]. 邵琪.内蒙古大学 2016
[3]白沙蒿铁蛋白基因对烟草的遗传转化及其抗旱性检测[D]. 张芳.兰州大学 2013
本文编号：3244961
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
载体pGBKT7-DBD-MfNAC35（c）示意图
图 2.2 pBI121（35S-MfNAC35-NOS）载体与检测引物位点示意图引物 pBI121-（35S-MfNAC35）F 位点；P2：引物 pBI121-（35S-MfNAC35）R 位点；引物 pBI121-（MfNAC35-NOS）F 位点；P4：引物 pBI121-（MfNAC35-NOS）R 位点Fig.2.2 The sketch map of pBI121 (35S-MfNAC35-NOS) vector and primer landing sitehe site of prime pBI121-（35S-MfNAC35）F; P2: The site of prime pBI121-（35S-MfNAhe site of prime pBI121-（MfNAC35-NOS）F; P4: The site of prime pBI121-（MfNAC3化植株的 PCR 检测 法[71]提取转化植株叶片 DNA 作为模板，以图 2.2 所示设计引物 pBI121-AC35）F 和 pBI121（-35S-MfNAC35）R 以及 pBI121（-MfNAC35-NOS）F 和 5-NOS）R，进行 PCR 鉴定转化 pBI121-（35S-MfNAC35-NOS）的再生植0×PCR Buffer 2.5 μL物 1 2.5 μL物 2 2.5 μLNTPS(2.5 mmol/Leach) 2 μL
图 3.1 MfNAC35 保守结构域分析Fig.3.1Analysis of conserved domains of MfNAC35表 3.1 MfNAC35 基因的氨基酸组成Table3.1Amino acid content of MfNAC35一级结构预测 ProtParam 软件包分析该蛋白的一级结构及其理化性质，结果如表 3.1 和AC35 蛋白分子量约为 33.79kDa，等电点为 6.46，为酸性蛋白，含有 292 、Pro 和 Asp 含量相对较高，分别为 9.2%和 7.2%；带负电荷的残基 (As正电荷的残基(Arg + Lys)为 38 个，推测该蛋白带负电荷；蛋白质的稳定系数定蛋白[76]。氨基酸 数量 百分比 氨基酸 数量 百分比
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同处理对打破野生黄花苜蓿种子硬实的效果研究[J]. 伊风艳,王晓娟,杨鼎,邱晓,孙海莲,贾明,刘思博. 种子. 2018(01)
[2]甘蓝OguCMS育性相关转录因子BoMYB1的转录激活功能分析[J]. 陈玉娟,颉建明,郭盈盈,康俊根. 西北农业学报. 2014(10)
[3]水分胁迫下16个玉米NAC转录因子的序列特征和表达分析[J]. 张进艳,陈芳,李亮,马艺文,王振萍,姜立雁,王化俊,郝转芳. 山西农业科学. 2014(04)
[4]NAC转录因子在植物抗病和抗非生物胁迫反应中的作用[J]. 孙利军,李大勇,张慧娟,宋凤鸣. 遗传. 2012(08)
博士论文
[1]水稻ONAC家族基因重叠表达特性及其在抗病抗逆中的功能研究[D]. 孙利军.浙江大学 2012
[2]中国黄花苜蓿野生种质资源研究[D]. 王俊杰.内蒙古农业大学 2008
硕士论文
[1]野生黄花苜蓿MfNAC3的克隆分析及表达载体的构建[D]. 张芳蜞.内蒙古大学 2017
[2]黄花苜蓿NAC转录因子的初步研究[D]. 邵琪.内蒙古大学 2016
[3]白沙蒿铁蛋白基因对烟草的遗传转化及其抗旱性检测[D]. 张芳.兰州大学 2013
本文编号：3244961
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3244961.html
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