MrDREB1基因在扁蓿豆逆境胁迫调控应答中分子机理的初步研究
发布时间：2021-06-25 06:53
DREB类转录因子在非生物胁迫过程中起重要作用,目前,对DREB类转录因子研究多集中在功能验证上,对其分子调控机制研究较少。本实验室前期研究表明超表达MrDREB1基因在扁蓿豆中可以提高扁蓿豆对低温、干旱、高盐的抗性。说明MrDREB1基因可以增强植物对非生物胁迫的抗逆性。本研究以扁蓿豆的MrDREB1基因为研究对象,通过毛根转化法将超表达MrDREB1基因载体、tasiRNA介导的MrDREB1基因沉默载体和对照载体转入扁蓿豆根组织中,荧光体式显微镜检测出有外源基因表达的扁蓿豆根组织。提取单株扁蓿豆根组织RNA,每个样品3个生物学重复,共9个样品。通过Q-PCR方法检测抗逆相关基因MrERD10和MrCAS15A的相对表达量,MrERD10和MrCAS15A基因在超表达MrDREB1基因扁蓿豆中表达量高于对照组,在基因沉默MrDREB1基因扁蓿豆表达量低于对照组,证明瞬时表达构建可靠,可以进行转录组测序。通过对转录组数据分析得到受MrDREB1基因调控的抗非生物胁迫相关的基因。扁蓿豆转录组测序得到67.35Gb clean bases,对原始序列进行过滤后经de nove组装得到28...
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DREB/CBF转录因子结构示意图
内蒙古大学硕士论文3 结果与分析3.1 毛根转化扁蓿豆幼苗筛选利用毛根转化可以将外源基因导入受体植物中进行瞬时表达，可以快速、安全高效植物体内的基因表达模式。本次实验使用毛根转化方法得到转超表达 MrDREB1 扁、转空载体扁蓿豆幼苗、转由 tasi-RNA 介导的基因沉默 MrDREB1 基因幼苗。在毛幼苗生长 15 天进行荧光显微镜筛选，转入成功的幼苗根部在绿色激发光的荧光显检测红色荧光，结果如图 3.1 所示。
MrDREB1 基因在扁蓿豆逆境胁迫调控应答中分子机理的初步研究3.2 扁蓿豆总 RNA 的验证程（大连）有限公司购得的 TaKaRa MiniBEST PlanA 的操作结果，在 1.0%的琼脂凝胶中电泳检测，结条带清晰且明亮，能清楚观察到 28S rRNA 和 18S 提取的 RNA 浓度，RNA 浓度在 46ng/μl 到 256ng/μl间，说明 RNA 质量较好。
【参考文献】：
期刊论文
[1]扁蓿豆根系及根颈形态变化与抗寒性关系的初步研究[J]. 杜宝红,石凤翎,王晓英. 农业与技术. 2018(18)
[2]扁蓿豆育种研究进展[J]. 张雨桐,石凤翎,乌日娜,刘胜男. 中国草地学报. 2018(05)
[3]低温胁迫下杜鹃杂交后代优良株系的转录组分析[J]. 吴月燕,明萌,何静雯,卢丹,沈梓力,邱甜,吴燕燕,谢晓鸿. 华北农学报. 2017(05)
[4]优异牧草品种介绍[J]. 李鸿雁. 植物遗传资源学报. 2015(01)
[5]内蒙古扁蓿豆叶片解剖性状与抗旱性的研究[J]. 李鸿雁,李志勇,师文贵,蔡丽艳,刘磊. 草业学报. 2012(03)
[6]扁蓿豆的优良特性与开发利用[J]. 邢建军,李鸿雁,蔡丽艳,李志勇,解永凤. 现代农业. 2011(12)
[7]扁蓿豆的抗性研究进展[J]. 韩海波,师文贵,李志勇,李鸿雁,李兴酉,刘磊,王晓娜. 草业科学. 2011(04)
[8]DREB/CBF类转录因子研究进展及其在草坪草和牧草抗逆基因工程中的应用[J]. 王舟,刘建秀. 草业学报. 2011(01)
[9]6种豆科牧草叶片解剖性状与抗旱性关系研究[J]. 李鸿雁,李志勇,师文贵,李兴酉,刘磊. 西北植物学报. 2010(10)
[10]高等植物转录因子研究进展[J]. 陈霞,罗世巧,段翠芳,曾日中. 安徽农学通报. 2008(09)
博士论文
[1]紫花苜蓿在转录组水平响应低温胁迫的差异表达基因研究[D]. 齐晓.中国农业科学院 2017
[2]扁蓿豆抗寒相关基因的克隆与表达分析[D]. 张宇.内蒙古农业大学 2013
[3]番茄耐寒种质低温胁迫下的转录组分析及相关基因功能鉴定[D]. 刘辉.华中农业大学 2012
硕士论文
[1]盐胁迫甘草愈伤组织转录组测序分析[D]. 潘笑.河北大学 2018
[2]中国野生山葡萄VaERD15基因的功能验证[D]. 于冬冬.西北农林科技大学 2016
[3]低温胁迫下西葫芦转录组分析与SSR分子标记开发[D]. 张宏亮.山西农业大学 2015
[4]蒙古沙冬青转录组测序和AmDREB1F基因的克隆[D]. 董博.内蒙古农业大学 2014
[5]植物抗逆相关基因的分离及功能分析[D]. 冶晓芳.首都师范大学 2009
[6]扁蓿豆根颈形态解剖特征和物质积累规律与抗寒性的研究[D]. 杜宝红.内蒙古农业大学 2007
[7]大豆抗逆相关转录因子基因GmDREB5和GmERF1的特性分析及功能鉴定[D]. 王巧燕.新疆农业大学 2006
本文编号：3248729
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DREB/CBF转录因子结构示意图
内蒙古大学硕士论文3 结果与分析3.1 毛根转化扁蓿豆幼苗筛选利用毛根转化可以将外源基因导入受体植物中进行瞬时表达，可以快速、安全高效植物体内的基因表达模式。本次实验使用毛根转化方法得到转超表达 MrDREB1 扁、转空载体扁蓿豆幼苗、转由 tasi-RNA 介导的基因沉默 MrDREB1 基因幼苗。在毛幼苗生长 15 天进行荧光显微镜筛选，转入成功的幼苗根部在绿色激发光的荧光显检测红色荧光，结果如图 3.1 所示。
MrDREB1 基因在扁蓿豆逆境胁迫调控应答中分子机理的初步研究3.2 扁蓿豆总 RNA 的验证程（大连）有限公司购得的 TaKaRa MiniBEST PlanA 的操作结果，在 1.0%的琼脂凝胶中电泳检测，结条带清晰且明亮，能清楚观察到 28S rRNA 和 18S 提取的 RNA 浓度，RNA 浓度在 46ng/μl 到 256ng/μl间，说明 RNA 质量较好。
【参考文献】：
期刊论文
[1]扁蓿豆根系及根颈形态变化与抗寒性关系的初步研究[J]. 杜宝红,石凤翎,王晓英. 农业与技术. 2018(18)
[2]扁蓿豆育种研究进展[J]. 张雨桐,石凤翎,乌日娜,刘胜男. 中国草地学报. 2018(05)
[3]低温胁迫下杜鹃杂交后代优良株系的转录组分析[J]. 吴月燕,明萌,何静雯,卢丹,沈梓力,邱甜,吴燕燕,谢晓鸿. 华北农学报. 2017(05)
[4]优异牧草品种介绍[J]. 李鸿雁. 植物遗传资源学报. 2015(01)
[5]内蒙古扁蓿豆叶片解剖性状与抗旱性的研究[J]. 李鸿雁,李志勇,师文贵,蔡丽艳,刘磊. 草业学报. 2012(03)
[6]扁蓿豆的优良特性与开发利用[J]. 邢建军,李鸿雁,蔡丽艳,李志勇,解永凤. 现代农业. 2011(12)
[7]扁蓿豆的抗性研究进展[J]. 韩海波,师文贵,李志勇,李鸿雁,李兴酉,刘磊,王晓娜. 草业科学. 2011(04)
[8]DREB/CBF类转录因子研究进展及其在草坪草和牧草抗逆基因工程中的应用[J]. 王舟,刘建秀. 草业学报. 2011(01)
[9]6种豆科牧草叶片解剖性状与抗旱性关系研究[J]. 李鸿雁,李志勇,师文贵,李兴酉,刘磊. 西北植物学报. 2010(10)
[10]高等植物转录因子研究进展[J]. 陈霞,罗世巧,段翠芳,曾日中. 安徽农学通报. 2008(09)
博士论文
[1]紫花苜蓿在转录组水平响应低温胁迫的差异表达基因研究[D]. 齐晓.中国农业科学院 2017
[2]扁蓿豆抗寒相关基因的克隆与表达分析[D]. 张宇.内蒙古农业大学 2013
[3]番茄耐寒种质低温胁迫下的转录组分析及相关基因功能鉴定[D]. 刘辉.华中农业大学 2012
硕士论文
[1]盐胁迫甘草愈伤组织转录组测序分析[D]. 潘笑.河北大学 2018
[2]中国野生山葡萄VaERD15基因的功能验证[D]. 于冬冬.西北农林科技大学 2016
[3]低温胁迫下西葫芦转录组分析与SSR分子标记开发[D]. 张宏亮.山西农业大学 2015
[4]蒙古沙冬青转录组测序和AmDREB1F基因的克隆[D]. 董博.内蒙古农业大学 2014
[5]植物抗逆相关基因的分离及功能分析[D]. 冶晓芳.首都师范大学 2009
[6]扁蓿豆根颈形态解剖特征和物质积累规律与抗寒性的研究[D]. 杜宝红.内蒙古农业大学 2007
[7]大豆抗逆相关转录因子基因GmDREB5和GmERF1的特性分析及功能鉴定[D]. 王巧燕.新疆农业大学 2006
本文编号：3248729
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