川白芷抑菌机理研究及香豆素生物合成关键基因的挖掘
发布时间：2021-06-25 21:12
随着抗生素的不合理和大规模使用,细菌的耐药性越来越强,这让细菌疾病的治疗再一次陷入困难,寻找新型的抑菌药物已成为非常重要的研究课题。天然产物的开发与利用是目前的研究热点,川白芷Angelica dahurica（Fish.ex Hoffm.）Benth.et Hook.f.var.formosana（Boiss.）Shan et Yuan是著名的川产道地药材之一,以根入药,具有良好的药效价值和多种药理活性。目前,川白芷的抑菌作用研究较浅,作用成分的代谢途径更是鲜见研究。本研究以课题组前期选育的川白芷新品种为材料,通过对其提取物进行体外抑菌、群体感应抑制和中药-抗生素联用等试验,以期阐明川白芷的抑菌作用及机理,为寻找新型的抑菌药物提供理论依据;通过对川白芷转录组数据的挖掘,寻找调控川白芷中抑菌物质的代谢途径关键酶基因,为川白芷抑菌成分的进一步开发利用,遗传育种和代谢工程奠定基础和提供科学依据。主要研究结果如下:（1）以川白芷根部为材料,通过醇提法得到川白芷粗提药液,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌和铜绿假单胞菌进行体外抑菌能力效果试验。结果表明,川白芷粗提物对四种致病性菌株都有...
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
植物苯丙烷代谢途径[74]
183.3结果与分析3.3.1川白芷对铜绿假单胞菌绿脓菌素产量的影响如图3.1所示，在低于MIC浓度下，随着川白芷提取物浓度的增加，OD520减小；但是发现随着浓度降到极低，毒力因子反而呈现增加趋势，结果说明川白芷提取物在25mg/mL浓度下抑制了群体感应作用，使其调控下生成的绿脓菌素量减少，但当浓度继续降低到17.5mg/mL或者一个阈值时，川白芷中的某些成分反而会促进绿脓菌素的生成。图3.1白芷提取物对绿脓菌素产量的影响，**P＜0.01Fig3.1EffectofAngelicaedahuricaextractontheyieldofPseudomonasaeruginosa,**P＜0.013.3.2脱脂牛奶平板法测铜绿假单胞菌胞外蛋白酶细菌的胞外蛋白酶可以分解培养基中牛奶，试验表现就是平板上小孔周围的牛奶被分解，呈现一个透明圈状。试验结果如图3.2所示，随着白芷提取物的浓度增加，透明圆圈的直径逐渐变小，但是当浓度低于17.5mg/mL或者某一个阈值时，相对于对照组牛奶被分解的更多，这说明川白芷提取物中某些成分可以促进细菌胞外蛋白酶的产生，或者促进群体感应，表明川白芷提取物中不仅有抑制蛋白酶产生的成分，也有可能含有促进产生的物质。
19图3.2脱脂牛奶平板法测胞外蛋白酶，**P＜0.01Fig3.2Determinationofextracellularproteasebyskimmilkplatemethod,**P＜0.013.3.3结晶紫染色法测定铜绿假单胞菌生物膜试验发现，离心管中长时间培养下菌液会形成一层薄膜，附着在管壁上，且很难被生理盐水冲洗掉。这层膜结构就是铜绿假单胞菌的生物膜，具有抵御外界不良环境的影响。如图3.3所示，川白芷提取物在浓度高于25mg/mL时，能抑制铜绿假单胞菌的生物膜形成，而且浓度越大，抑制效果越明显；但是当浓度低于17.5mg/mL或者某一阈值时，生物膜的产量反而有所增加，这说明川白芷中的成分功能多样，或者是某一种成分在不同浓度发挥了不同的作用。图3.3结晶紫染色法测定生物膜产量，**P＜0.01Fig3.3Determinationofbiofilmyieldbycrystalvioletstaining,**P＜0.01
【参考文献】：
期刊论文
[1]新型抗生素的研发进展[J]. 李耿,刘晓志,高健,王志明. 中国抗生素杂志. 2018(12)
[2]澳发现新“超级细菌”或对所有已知抗生素都有抗药性[J]. 养猪. 2018(06)
[3]中药替代抗生素对鸡影响的研究进展[J]. 赵国顺. 甘肃畜牧兽医. 2017(12)
[4]白芷香豆素的抑菌及稳定性研究[J]. 杨柳,刘长姣,李玉邯,陈宇飞,王磊,张一. 中国调味品. 2016(05)
[5]白芷总香豆素类有效部位的纯化工艺研究[J]. 施婷婷,王建新,李希. 中药与临床. 2015(01)
[6]枯草芽孢杆菌形成生物被膜的研究进展[J]. 刘伟杰,刘聪,蒋继宏. 微生物学报. 2014(09)
[7]白芷香豆素的提取及其抑菌活性研究[J]. 周淑敏. 食品工业. 2014(03)
[8]白芷的化学成分研究[J]. 张烨,孙建,屠鹏飞,薛培凤. 内蒙古医学院学报. 2012(04)
[9]白芷的提取工艺[J]. 索建兰,袁佳妹. 光谱实验室. 2012(03)
[10]论白芷的活血作用[J]. 樊凯芳,赵建平,冯振宇. 中国中医急症. 2011(12)
博士论文
[1]嗜水气单胞菌浮游态和生物被膜状态比较蛋白质组学及相关蛋白特性分析[D]. 王娜.南京农业大学 2012
硕士论文
[1]多粘菌素E诱导肠道菌群失调对肠屏障功能及细菌易位的影响[D]. 王宏刚.南京大学 2012
本文编号：3249957
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
植物苯丙烷代谢途径[74]
183.3结果与分析3.3.1川白芷对铜绿假单胞菌绿脓菌素产量的影响如图3.1所示，在低于MIC浓度下，随着川白芷提取物浓度的增加，OD520减小；但是发现随着浓度降到极低，毒力因子反而呈现增加趋势，结果说明川白芷提取物在25mg/mL浓度下抑制了群体感应作用，使其调控下生成的绿脓菌素量减少，但当浓度继续降低到17.5mg/mL或者一个阈值时，川白芷中的某些成分反而会促进绿脓菌素的生成。图3.1白芷提取物对绿脓菌素产量的影响，**P＜0.01Fig3.1EffectofAngelicaedahuricaextractontheyieldofPseudomonasaeruginosa,**P＜0.013.3.2脱脂牛奶平板法测铜绿假单胞菌胞外蛋白酶细菌的胞外蛋白酶可以分解培养基中牛奶，试验表现就是平板上小孔周围的牛奶被分解，呈现一个透明圈状。试验结果如图3.2所示，随着白芷提取物的浓度增加，透明圆圈的直径逐渐变小，但是当浓度低于17.5mg/mL或者某一个阈值时，相对于对照组牛奶被分解的更多，这说明川白芷提取物中某些成分可以促进细菌胞外蛋白酶的产生，或者促进群体感应，表明川白芷提取物中不仅有抑制蛋白酶产生的成分，也有可能含有促进产生的物质。
19图3.2脱脂牛奶平板法测胞外蛋白酶，**P＜0.01Fig3.2Determinationofextracellularproteasebyskimmilkplatemethod,**P＜0.013.3.3结晶紫染色法测定铜绿假单胞菌生物膜试验发现，离心管中长时间培养下菌液会形成一层薄膜，附着在管壁上，且很难被生理盐水冲洗掉。这层膜结构就是铜绿假单胞菌的生物膜，具有抵御外界不良环境的影响。如图3.3所示，川白芷提取物在浓度高于25mg/mL时，能抑制铜绿假单胞菌的生物膜形成，而且浓度越大，抑制效果越明显；但是当浓度低于17.5mg/mL或者某一阈值时，生物膜的产量反而有所增加，这说明川白芷中的成分功能多样，或者是某一种成分在不同浓度发挥了不同的作用。图3.3结晶紫染色法测定生物膜产量，**P＜0.01Fig3.3Determinationofbiofilmyieldbycrystalvioletstaining,**P＜0.01
【参考文献】：
期刊论文
[1]新型抗生素的研发进展[J]. 李耿,刘晓志,高健,王志明. 中国抗生素杂志. 2018(12)
[2]澳发现新“超级细菌”或对所有已知抗生素都有抗药性[J]. 养猪. 2018(06)
[3]中药替代抗生素对鸡影响的研究进展[J]. 赵国顺. 甘肃畜牧兽医. 2017(12)
[4]白芷香豆素的抑菌及稳定性研究[J]. 杨柳,刘长姣,李玉邯,陈宇飞,王磊,张一. 中国调味品. 2016(05)
[5]白芷总香豆素类有效部位的纯化工艺研究[J]. 施婷婷,王建新,李希. 中药与临床. 2015(01)
[6]枯草芽孢杆菌形成生物被膜的研究进展[J]. 刘伟杰,刘聪,蒋继宏. 微生物学报. 2014(09)
[7]白芷香豆素的提取及其抑菌活性研究[J]. 周淑敏. 食品工业. 2014(03)
[8]白芷的化学成分研究[J]. 张烨,孙建,屠鹏飞,薛培凤. 内蒙古医学院学报. 2012(04)
[9]白芷的提取工艺[J]. 索建兰,袁佳妹. 光谱实验室. 2012(03)
[10]论白芷的活血作用[J]. 樊凯芳,赵建平,冯振宇. 中国中医急症. 2011(12)
博士论文
[1]嗜水气单胞菌浮游态和生物被膜状态比较蛋白质组学及相关蛋白特性分析[D]. 王娜.南京农业大学 2012
硕士论文
[1]多粘菌素E诱导肠道菌群失调对肠屏障功能及细菌易位的影响[D]. 王宏刚.南京大学 2012
本文编号：3249957
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