携带自杀基因Dm-dNK和CD40L的选择复制型腺病毒对乳腺癌杀伤作用的研究
发布时间：2021-06-27 10:26
目的:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,死亡率继肺癌之后,位列女性恶性肿瘤死亡率第二。根据美国癌症协会最新统计数据,1989年至2015年间,死亡率下降了39%,322600美国乳腺癌女性的命运被扭转,这得益于诊疗方法的提高（例如辅助化疗、内分泌治疗、靶向治疗等）和乳腺疾病的早期筛查。过去的20多年间,在遗传性疾病、恶性肿瘤、慢性感染性疾病等多领域展开了基因治疗的相关实验,一些基于基因治疗的I期、II期临床试验报道了严重的血液、免疫、神经系统遗传性疾病中基因治疗的显著疗效。自杀基因Dm-dNK编码的果蝇多底物脱氧核苷酸激酶具有广泛的底物特异性,能有效催化自然界所有的脱氧核糖核酸的磷酸化反应,催化效率比一般的核苷酸激酶高10-100倍,已有研究证实其作为自杀基因联合癌前药物在多种恶性肿瘤细胞的有效作用,不仅能直接杀伤肿瘤细胞,还能通过旁观者效应间接杀伤,同时有效提高对化疗药物的敏感性。乳腺癌、肠癌、肝癌等多种癌细胞表面均表达CD40,已有研究证明CD40-CD40配体（CD40 ligand,CD40L）交互作用能增强免疫应答,诱导抗原呈递细胞的活化,还可通过诱导癌细胞凋亡直接抑制肿瘤生长。...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：84 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
溶瘤腺病毒P74,P74-dNK，P74-CD40L,P74-dNK-CD40L的构建结构图
图 2 用携带绿色荧光蛋白的选择复制型腺病毒 Ad-GFP 感染三种细胞系，感染率相近。3.2 目的基因的表达及酶活性的检测3.2.1RNA 水平检测重组腺病毒中目的基因表达。两种乳腺癌细胞系 MDA-MB-231, MCF-7,人胚肺成纤维细胞 MRC5 感染P74-dNK,P74-CD40L,P74-dNK-CD40L 和 Ad-WT（MOI=1），24h 后收取 RNA 逆转录，扩增 dNK，CD40L, GAPDH, 结果见下图。重组病毒在 RNA 水平稳定表达目的基因。
中国医科大学博士学位论文21图3 不同细胞感染P74-dNK, P74-CD40L, P74-dNK-CD40L, Ad-WT后, 提取RNA，RT-PCR 验证，其中：Dm-dNK-6his（799 bp），CD40L（764 bp），GAPDH(452 bp)。3.2.2 蛋白水平验证目的基因的表达乳腺癌细胞系 MDA-MB-231 和正常细胞系 MRC5 感染 Ad-WT, P74-dNK,P74-CD40L, P74-dNK-CD40L,检测 E1A 表达情况，可见两种细胞系中均有 E1A 表达，验证重组腺病毒中 E1A 并未缺失，然 MRC5 中 Ad-WT 表达较其他重组病毒E1A 表达明显增强
【参考文献】：
期刊论文
[1]慢病毒载体及其研究进展[J]. 孟凡荣,陈琛,万海粟,周清华. 中国肺癌杂志. 2014(12)
[2]Activation of CD40 by Soluble Recombinant Human CD40 Ligand Inhibits Human Glioma Cells Proliferation via Nuclear Factor-κB Signaling Pathway[J]. 张勇,黄涛,胡谊,王煜. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2012(05)
本文编号：3252670
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：84 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
溶瘤腺病毒P74,P74-dNK，P74-CD40L,P74-dNK-CD40L的构建结构图
图 2 用携带绿色荧光蛋白的选择复制型腺病毒 Ad-GFP 感染三种细胞系，感染率相近。3.2 目的基因的表达及酶活性的检测3.2.1RNA 水平检测重组腺病毒中目的基因表达。两种乳腺癌细胞系 MDA-MB-231, MCF-7,人胚肺成纤维细胞 MRC5 感染P74-dNK,P74-CD40L,P74-dNK-CD40L 和 Ad-WT（MOI=1），24h 后收取 RNA 逆转录，扩增 dNK，CD40L, GAPDH, 结果见下图。重组病毒在 RNA 水平稳定表达目的基因。
中国医科大学博士学位论文21图3 不同细胞感染P74-dNK, P74-CD40L, P74-dNK-CD40L, Ad-WT后, 提取RNA，RT-PCR 验证，其中：Dm-dNK-6his（799 bp），CD40L（764 bp），GAPDH(452 bp)。3.2.2 蛋白水平验证目的基因的表达乳腺癌细胞系 MDA-MB-231 和正常细胞系 MRC5 感染 Ad-WT, P74-dNK,P74-CD40L, P74-dNK-CD40L,检测 E1A 表达情况，可见两种细胞系中均有 E1A 表达，验证重组腺病毒中 E1A 并未缺失，然 MRC5 中 Ad-WT 表达较其他重组病毒E1A 表达明显增强
【参考文献】：
期刊论文
[1]慢病毒载体及其研究进展[J]. 孟凡荣,陈琛,万海粟,周清华. 中国肺癌杂志. 2014(12)
[2]Activation of CD40 by Soluble Recombinant Human CD40 Ligand Inhibits Human Glioma Cells Proliferation via Nuclear Factor-κB Signaling Pathway[J]. 张勇,黄涛,胡谊,王煜. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2012(05)
本文编号：3252670
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3252670.html
最近更新
教材专著
