罗伯茨绿僵菌金属蛋白酶基因（mamp1）的功能分析

发布时间：2021-07-01 11:15

　　昆虫病原真菌是昆虫病原微生物中最大的一个类群,全世界已报道的昆虫病原真菌有近1000多种,是自然界控制昆虫种群数量的主要因素之一。绿僵菌（Metarhzium spp.）是一类重要的昆虫病原真菌,目前已经被广泛地应用于害虫的防治中[1]。但是由于传统的绿僵菌农药致病过程较长、杀虫较慢,不仅田间使用剂量大、成本高,而且防效易受环境影响,从而限制了绿僵菌杀虫剂的进一步大规模的应用。绿僵菌侵染昆虫是一个比较复杂的过程,其蛋白酶在绿僵菌入侵过程中起着重要的作用,是关键的毒力决定因子。目前在绿僵菌中研究较多的类枯草杆菌蛋白酶（Prl）、类胰凝乳蛋白酶（Pr2）。而金属蛋白酶为绿僵菌侵染昆虫早期分泌出的一种胞外蛋白酶,也是一种重要的毒力因子。本实验的前期研究表明,野生型罗伯茨绿僵菌（Mr23）热激后所形成的的基因表达谱,金属蛋白酶1（Mamp1）的基因表达上调幅度明显,因此我们推断罗伯茨绿僵菌在热胁迫条件下,Mamp1在孢子的耐热过程中起重要的作用[2],且目前对Mamp1的毒力因子功能也未见进行基因敲除验证。为了探讨绿僵菌金属蛋白酶的确切功能,本研究以野生型绿僵菌ARSEF 23（Metarhi... 

【文章来源】：安徽农业大学安徽省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

目的基因的扩增产物条带进行胶回收，然后连接到T载体上转化大肠杆菌进行克隆，得到的阳性单克隆送Fig.3-1TheamplificationproductsoftargetgeneMamp1

然后连接到 T 载体上转化大肠杆菌进行克隆，得到的阳性单克大基因进行测序，测序结果用 Vctor 软件进行序列比对分析，结果与已知Mamp1 的 5′RACE 和 3′RACE 结果′RACE 反应的结果如 4-2-5a 所示，条带大小约为 300 bp ， 5′RACE 反应Fig.3-1 The amplification products of target gene Mamp1

然后连接到 T 载体上转化大肠杆菌进行克隆，得到的阳性单克大基因进行测序，测序结果用 Vctor 软件进行序列比对分析，结果与已知Mamp1 的 5′RACE 和 3′RACE 结果′RACE 反应的结果如 4-2-5a 所示，条带大小约为 300 bp ， 5′RACE 反应Fig.3-1 The amplification products of target gene Mamp1

【参考文献】：
期刊论文
[1]我国利用真菌防治害虫的历史、进展及现状[J]. 李增智.  中国生物防治学报. 2015(05)
[2]蛇毒金属蛋白酶[J]. 张雷,刘明华.  中国急救医学. 2013 (11)
[3]真菌杀虫剂的研究现状与展望[J]. 解娇,刘霞,张正坤,徐文静,李启云.  吉林农业科学. 2012(01)
[4]营养条件对绿僵菌生长特性和抑菌活性的影响[J]. 齐永霞,陈方新,李增智.  食品与发酵工业. 2011(07)
[5]基因工程改良在昆虫病原真菌中的应用[J]. 边强,王广君,张泽华,高松,农向群.  中国生物工程杂志. 2009(03)
[6]虫生真菌分子致病机理及基因工程改造研究进展[J]. 吕丁丁,李增智,王成树.  微生物学通报. 2008(03)
[7]我国微生物杀虫剂的研究应用及展望[J]. 谭云峰,田志来.  吉林农业科学. 2005(03)
[8]虫生真菌对害虫防治的研究与应用[J]. 何恒果,李正跃,陈斌,文良柱.  云南农业大学学报. 2004(02)
[9]柱孢绿僵菌和绿色野村菌分类地位的研究[J]. 黄勃,李世贵,李春如,樊美珍,李增智.  菌物学报. 2004(01)
[10]生物杀虫剂的研究进展与展望[J]. 张善明,姚伦广,彭建新,洪华珠.  荆州师范学院学报. 2000(02)

博士论文
[1]杉木转基因受体系统的建立及遗传转化研究[D]. 席梦利.南京林业大学 2004



本文编号：3259035