电针长强穴对FMR1基因敲除小鼠海马区CypA-ERK1/2通路及其阻断效应的研究
发布时间：2021-07-04 02:11
目的观察电针长强穴对FMR1基因敲除小鼠海马区CypA、ERK1/2及CREB蛋白表达的影响及对其阻断效应的研究。方法选取FMR1基因缺失且日龄为25日的KO小鼠,通过聚合酶链式反应鉴定小鼠基因型,选取基因型为纯合子型的小鼠入组,随机分为空白组、长强穴组、非经非穴组和阻断剂长强穴组,共24只。所有组别的小鼠均于每日固定时间段进行干预,1天1次,连续干预14天。干预前、后连续两天于固定时间内对各组实验小鼠进行自主活动行为学测试。采取免疫组化法及免疫印迹法分析海马区CypA、ERK1/2、CREB蛋白的表达情况。结果①自主活动行为学测试结果:干预后长强穴组自主活动及站立次数低于其他组别;干预后自主活动及站立次数低于干预前。②免疫组化法检测结果:长强穴组CypA、CREB蛋白的阳性平均光密度表达高于空白组、非经非穴组和阻断剂长强穴组,具有统计学意义（P<0.05）;长强穴组ERK1/2蛋白的阳性平均光密度表达高于空白组及阻断剂长强穴组,具有统计学意义（P<0.05）。③免疫印迹法检测结果:长强穴组CypA、ERK1/2及CREB蛋白的表达高于空白组、非经非穴组和阻断剂长强穴组,其...
【文章来源】：时珍国医国药. 2019,30(01)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
基因鉴定结果q
VDF膜上，在凝胶成像系统中进行化学发光显影、采集及观察。免疫印迹检测过程中所有目的条带以alphaTubulin为内参，蛋白表达含量为各蛋白与alphaTubulin光密度积分值的比值。1．6统计学分析数据的统计分析采用统计学软件SPSS21。采用单因素方差分析和最小显著差法(LSD)进行组间比较，P＜0．05提示差异具有统计学意义。采用配对t检对干预前后实验小鼠自主活动及站立行为进行比较，P＜0．05提示差异具有统计学意义。2结果2．1各组实验小鼠自主活动站立行为学测试结果如图2，干预后小鼠自主活动行为长强穴组与空白组、非经非穴组相比显著性降低，具有统计学意义(P＜0．05);干预后小鼠自主站立行为长强穴组及阻断剂长强穴组与非经非穴组相比显著性降低，具有统计学意义(P＜0．05);干预后与干预前比较，长强穴组实验小鼠自主活动及站立行为显著性降低。提示电针长强穴对实验小鼠自主活动站立行为有影响。*P＜0．05;＊＊P＜0．01;n=6图2各组实验小鼠干预前后自主活动站立行为学测试结果2．2免疫组化法检测各组小鼠海马区CypA、EＲK1/2、CＲEB表达的结果各组实验小鼠的免疫组化切片观察中可看到:海马区神经元胞浆与突起内有棕黄色免疫组化反应颗粒状沉积物。如图3～5可见长强穴组阳性颗粒反应物表达明显且排列较密集，长强穴组CypA、CＲEB蛋白的阳性平均光密度表达高于空白组、非经非穴组和阻断剂长强穴组，具有统计学意义(P＜0．05);长强穴组EＲK1/2蛋白的阳性平均光密度表达高于空白组及阻断剂长强穴组，具有统计学意义(P＜0．05)。提示电针长强穴后可以激活CypA－EＲK1/2通路从而实现相关靶基因的转录，?
海马区CypA、EＲK1/2、CＲEB蛋白的表达。*P＜0．05;＊＊P＜0．01;n=6图3各组实验小鼠海马区CypA蛋白阳性目标平均光密度比较*P＜0．05;＊＊P＜0．01;n=6图4各组实验小鼠海马区EＲK1/2蛋白阳性目标平均光密度比较*P＜0．05;＊＊P＜0．01;＊＊＊P＜0．001;n=6图5各组实验小鼠海马区CＲEB蛋白阳性目标平均光密度比较2．3免疫印迹法检测各组小鼠海马区CypA、EＲK1/2、CＲEB表达的结果如图6～8长强穴组CypA、EＲK1/2及CＲEB蛋白的表达高于空白组、非经非穴组和阻断剂长强穴组，其中EＲK1/2及CＲEB蛋白具有统计学意义(P＜0．05)。电针长强穴后海马区长强穴组CypA、EＲK1/2、CＲEB蛋白表达量增加，说明电针长强穴对海马区该蛋白表达有促进作用，阻断剂长强穴组表达量与空白组比较减少，提示PD98059对CypA－EＲK1/2通路有阻断效应。*P＜0．05;n=6图6各组实验小鼠海马区CypA蛋白相对表达量比较·932·LISHIZHENMEDICINEANDMATEＲIAMEDICAＲESEAＲCH2019VOL．30NO．1时珍国医国药2019年第30卷第1期
【参考文献】：
期刊论文
[1]电针长强穴对FMR1基因敲除小鼠小脑CypA相关蛋白表达的影响及其阻断效应研究[J]. 林栋,卜婉萍,杨晓婷. 康复学报. 2017(05)
[2]胞外亲环素A对炎症发生的影响及其抗体在抑制炎症反应中的作用[J]. 李文博,刘薇,陈璨,范文辉,张鹤,刘文军,孙蕾. 生物工程学报. 2018(01)
[3]针刺长强穴配合感觉统合训练治疗精神发育迟滞20例[J]. 邹园华. 中国中医药现代远程教育. 2016(01)
[4]ERK1/2通路抑制剂PD98059影响卵巢癌细胞SKOV3增殖、侵袭能力的研究[J]. 吴忱莼,李留霞,郭瑞霞,雷婧,李秀芳,张孝艳,张颖. 中国妇幼保健. 2015(02)
[5]针刺长强穴治疗精神疾患的机制探讨[J]. 宋会会,王卫. 河北中医. 2014(05)
[6]针刺长强穴治疗精神发育迟滞患儿57例多中心临床研究报告[J]. 吴强,韩平,王振宇,张学君,宋妍,颜国辉,张洁,邹园华. 中华中医药杂志. 2011(11)
[7]An experimental study of extracellular signal-regulated kinase and its interventional treatments in hepatic fibrosis[J]. Ming-De Jiang, Shu-Mei Zheng, Hui Xu, Wei-Zheng Zeng, Yong Zhang, Hao-Ping Sun, Yun-Xia Wang, Jian-Ping Qin and Xiao-Ling WuAuthor Affiliations: Department of Gastroenterology, General Hospital of Chengdu Military Command, Chengdu 610083, China. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2008(01)
[8]MAPK/ERK信号转导通路与学习记忆[J]. 胡亚卓,吕佩源. 中国神经免疫学和神经病学杂志. 2006(06)
博士论文
[1]海马依赖性情节记忆调控的突触和神经环路机制研究[D]. 杨莹.华中科技大学 2012
本文编号：3263816
【文章来源】：时珍国医国药. 2019,30(01)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
基因鉴定结果q
VDF膜上，在凝胶成像系统中进行化学发光显影、采集及观察。免疫印迹检测过程中所有目的条带以alphaTubulin为内参，蛋白表达含量为各蛋白与alphaTubulin光密度积分值的比值。1．6统计学分析数据的统计分析采用统计学软件SPSS21。采用单因素方差分析和最小显著差法(LSD)进行组间比较，P＜0．05提示差异具有统计学意义。采用配对t检对干预前后实验小鼠自主活动及站立行为进行比较，P＜0．05提示差异具有统计学意义。2结果2．1各组实验小鼠自主活动站立行为学测试结果如图2，干预后小鼠自主活动行为长强穴组与空白组、非经非穴组相比显著性降低，具有统计学意义(P＜0．05);干预后小鼠自主站立行为长强穴组及阻断剂长强穴组与非经非穴组相比显著性降低，具有统计学意义(P＜0．05);干预后与干预前比较，长强穴组实验小鼠自主活动及站立行为显著性降低。提示电针长强穴对实验小鼠自主活动站立行为有影响。*P＜0．05;＊＊P＜0．01;n=6图2各组实验小鼠干预前后自主活动站立行为学测试结果2．2免疫组化法检测各组小鼠海马区CypA、EＲK1/2、CＲEB表达的结果各组实验小鼠的免疫组化切片观察中可看到:海马区神经元胞浆与突起内有棕黄色免疫组化反应颗粒状沉积物。如图3～5可见长强穴组阳性颗粒反应物表达明显且排列较密集，长强穴组CypA、CＲEB蛋白的阳性平均光密度表达高于空白组、非经非穴组和阻断剂长强穴组，具有统计学意义(P＜0．05);长强穴组EＲK1/2蛋白的阳性平均光密度表达高于空白组及阻断剂长强穴组，具有统计学意义(P＜0．05)。提示电针长强穴后可以激活CypA－EＲK1/2通路从而实现相关靶基因的转录，?
海马区CypA、EＲK1/2、CＲEB蛋白的表达。*P＜0．05;＊＊P＜0．01;n=6图3各组实验小鼠海马区CypA蛋白阳性目标平均光密度比较*P＜0．05;＊＊P＜0．01;n=6图4各组实验小鼠海马区EＲK1/2蛋白阳性目标平均光密度比较*P＜0．05;＊＊P＜0．01;＊＊＊P＜0．001;n=6图5各组实验小鼠海马区CＲEB蛋白阳性目标平均光密度比较2．3免疫印迹法检测各组小鼠海马区CypA、EＲK1/2、CＲEB表达的结果如图6～8长强穴组CypA、EＲK1/2及CＲEB蛋白的表达高于空白组、非经非穴组和阻断剂长强穴组，其中EＲK1/2及CＲEB蛋白具有统计学意义(P＜0．05)。电针长强穴后海马区长强穴组CypA、EＲK1/2、CＲEB蛋白表达量增加，说明电针长强穴对海马区该蛋白表达有促进作用，阻断剂长强穴组表达量与空白组比较减少，提示PD98059对CypA－EＲK1/2通路有阻断效应。*P＜0．05;n=6图6各组实验小鼠海马区CypA蛋白相对表达量比较·932·LISHIZHENMEDICINEANDMATEＲIAMEDICAＲESEAＲCH2019VOL．30NO．1时珍国医国药2019年第30卷第1期
【参考文献】：
期刊论文
[1]电针长强穴对FMR1基因敲除小鼠小脑CypA相关蛋白表达的影响及其阻断效应研究[J]. 林栋,卜婉萍,杨晓婷. 康复学报. 2017(05)
[2]胞外亲环素A对炎症发生的影响及其抗体在抑制炎症反应中的作用[J]. 李文博,刘薇,陈璨,范文辉,张鹤,刘文军,孙蕾. 生物工程学报. 2018(01)
[3]针刺长强穴配合感觉统合训练治疗精神发育迟滞20例[J]. 邹园华. 中国中医药现代远程教育. 2016(01)
[4]ERK1/2通路抑制剂PD98059影响卵巢癌细胞SKOV3增殖、侵袭能力的研究[J]. 吴忱莼,李留霞,郭瑞霞,雷婧,李秀芳,张孝艳,张颖. 中国妇幼保健. 2015(02)
[5]针刺长强穴治疗精神疾患的机制探讨[J]. 宋会会,王卫. 河北中医. 2014(05)
[6]针刺长强穴治疗精神发育迟滞患儿57例多中心临床研究报告[J]. 吴强,韩平,王振宇,张学君,宋妍,颜国辉,张洁,邹园华. 中华中医药杂志. 2011(11)
[7]An experimental study of extracellular signal-regulated kinase and its interventional treatments in hepatic fibrosis[J]. Ming-De Jiang, Shu-Mei Zheng, Hui Xu, Wei-Zheng Zeng, Yong Zhang, Hao-Ping Sun, Yun-Xia Wang, Jian-Ping Qin and Xiao-Ling WuAuthor Affiliations: Department of Gastroenterology, General Hospital of Chengdu Military Command, Chengdu 610083, China. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2008(01)
[8]MAPK/ERK信号转导通路与学习记忆[J]. 胡亚卓,吕佩源. 中国神经免疫学和神经病学杂志. 2006(06)
博士论文
[1]海马依赖性情节记忆调控的突触和神经环路机制研究[D]. 杨莹.华中科技大学 2012
本文编号：3263816
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